泮托拉唑对二乙基亚硝胺联合四氯化碳诱导C57BL/6J小鼠肝癌模型肝细胞增殖的影响

Abstract

目的: 探讨泮托拉唑对二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine, DEN)联合四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl₄)诱导C57BL/6J小鼠肝癌模型肝癌细胞增殖的影响.

方法: 将78只C57小鼠采用DEN联合CCl₄共同诱导C57BL/6J小鼠肝癌, 第9周将制模小鼠随机分为模型组、泮托拉唑低剂量组(40 mg/kg)、高剂量组(80 mg/kg), 并开始腹腔注射泮托拉唑, 同时取12只正常小鼠为对照. 第25周处死小鼠, 取正常肝组织、肝癌组织和癌旁组织, 肉眼观察拍片, 并作HE染色光镜检查. 采用生化法检查小鼠血清谷丙转氨酶(alanine transaminase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、尿素(urea)、肌酐(creatinine, Cr)水平; 采用Real-time PCR方法来检测正常肝、肝癌及癌旁组织甲胎蛋白(α-fetoprotein, AFP)、细胞增殖核抗原Ki67、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA) mRNA的表达, 采用Western blot法检测Ki67、PCNA蛋白的表达.

结果: 小鼠死亡率为21%, 成瘤率为100%. 肝脏组织巨检: 模型组与高低剂量组肝体积增大, 表面有大小不等的结节, 与模型组比较, 高、低剂量组结节个数明显减少. HE染色显示: 与模型组比较, 高、低剂量组异型增生明显减少. 血清生化检测显示: 模型组、高、低剂量组血清ALT、AST水平明显高于正常组(P<0.05), 高剂量组ALT、AST水平明显低于模型组(P<0.05). RT-PCR结果提示, 与正常组相比较, 模型组和高、低剂量组AFP、Ki67和PCNA mRNA表达明显增高(P<0.05, F = 7.94; P<0.05, F = 15.62; P<0.01, F = 45.58). 与模型组比较, 高剂量组Ki67和PCNA mRNA表达降低(P<0.05, F = 5.89; P<0.05, F = 10.34). Western blot结果显示, 与正常肝组织比较, 模型组和高剂量组的肝癌及癌旁组织Ki67和PCNA蛋白表达明显增高(P<0.05, F = 20.41; P<0.05, F = 20.31). 与模型组比较, 高剂量组肝癌及癌旁组织Ki67和PCNA蛋白表达明显减少(P<0.05, F = 16.47; P<0.05, F = 12.38).

结论: 泮托拉唑DEN联合CCl₄诱导C57BL/6J小鼠肝癌模型肝细胞增殖有抑制作用.

Keywords: 泮托拉唑; 二乙基亚硝胺; 肝癌; 增殖

核心提示: 通过二乙基亚硝胺(diethylnitro -samine)联合四氯化碳(carbon tetrachloride)诱导C57BL/6J小鼠肝癌模型, 采用RT-PCR和Western blot法来检测肝癌模型中肝癌及癌旁组织细胞增殖核抗原Ki67、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen) mRNA和蛋白的表达, 明确泮托拉唑对肝癌模型细胞增殖的影响.