研究快报
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世界华人消化杂志. 2014-02-28; 22(6): 813-818
Published online 2014-02-28. doi: 10.11569/wcjd.v22.i6.813
RNAi沉默Sp3基因对裸鼠人肝癌种植瘤细胞侵袭能力的影响
李佳, 陆会平, 莫伟嘉, 李海荣, 冯振博
李佳, 陆会平, 莫伟嘉, 李海荣, 冯振博, 广西医科大学第一附属医院病理科 广西壮族自治区南宁市 530021
李佳, 在读博士, 主要从事肝癌发病机制和预防的研究.
基金项目: 广西科学研究与技术开发计划基金资助项目, No. 桂科攻1298003-2-5; 广西新世纪十百千人才工程专项基金资助项目, No. 2007214; 广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题基金资助项目, No. Z2012052.
作者贡献分布: 裸鼠成瘤模型、Real-time PCR和免疫组织化学等主要实验由李佳完成, 莫伟嘉与李海荣协助完成; 细胞培养、慢病毒转染由陆会平完成; 数据分析和文章撰写由李佳完成; 课题指导、文章修改和审阅由冯振博完成.
通讯作者: 冯振博, 教授, 530021, 广西壮族自治区南宁市双拥路6号, 广西医科大学第一附属医院病理科. guanghu1963@126.com
电话: 0771-5356534
收稿日期: 2013-11-24
修回日期: 2013-12-24
接受日期: 2013-12-25
在线出版日期: 2014-02-28
Abstract

目的: 构建裸鼠人肝癌种植瘤模型, 观察沉默特异性蛋白3(specificity protein 3, Sp3)对裸鼠人肝癌种植瘤侵袭能力的影响, 并探讨其机制.

方法: 将Sp3 shRNA转染人肝癌HepG2细胞, 并设无关序列阴性组及空白组为对照, 建立3组裸鼠人肝癌种植瘤模型. 观察裸鼠肿瘤的成瘤率, 瘤体进行HE染色观察其病理学改变, 采用Real-time PCR及免疫组织化学检测瘤组织中Sp3、β-连接素(β-catenin)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP-9)mRNA和蛋白的表达情况.

结果: 实验组的成瘤率明显低于其他两组(60% vs 100%, 100%); HE观察实验组肿瘤细胞侵袭能力明显降低. 荧光定量PCR检测结果显示, 种植瘤中实验组的Sp3、β-catenin及MMP-9 mRNA相对表达量明显低于空白组及阴性组, 差异有统计学意义(F = 29.692, P = 0.001; F = 21.894, P = 0.002; F = 109.414, P<0.001); 实验组瘤体中E-cadherin mRNA的相对表达量高于其他两组(F = 66.983, P<0.001). 免疫组织化学结果显示, 实验组Sp3蛋白表达为30±5.69、β-catenin蛋白表达为28±5.13、MMP-9蛋白表达为97±10.41均低于空白组及阴性组; E-cadherin蛋白表达为132±4.36明显高于其他两组, 差异有统计学意义(P = 0.000).

结论: Sp3可通过上调β-catenin及其下游基因MMP-9表达, 同时下调E-cadherin的表达, 增强人肝癌细胞的侵袭能力.

Keywords: 沉默特异性蛋白3; 裸鼠; β-连接素; E-钙黏附蛋白; 基质金属蛋白酶9

核心提示: 本研究结果表明, 沉默特异性蛋白3(specificity protein 3)可通过上调Wnt/β-连接素(β-catenin)信号中β-catenin及其下游基因基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9)表达, 同时下调E-钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达, 增强肝癌细胞侵袭性, 共同促进肿瘤的演进.