基础研究
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世界华人消化杂志. 2014-12-18; 22(35): 5400-5407
Published online 2014-12-18. doi: 10.11569/wcjd.v22.i35.5400
山奈酚对内质网应激诱导的肝细胞损伤的保护及机制
郭媛媛, 任锋, 张向颖, 段钟平, 张桓虎
郭媛媛, 张桓虎, 山西医科大学第二临床医学院 山西省太原市 030001
任锋, 张向颖, 首都医科大学附属北京佑安医院肝病研究所 北京市 100069
段钟平, 首都医科大学附属北京佑安医院人工肝中心 北京市 100069
郭媛媛, 主要从事中西医结合治疗肝脏病的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81270532; 中国肝炎防治基金会王宝恩肝纤维化研究基金资助项目, No. CFHPC20131031; 首都临床特色应用研究基金资助项目, No. Z121107001012167.
作者贡献分布: 此课题由郭媛媛、任锋、段钟平及张桓虎设计; 研究过程及数据分析由郭媛媛、任锋及张向颖完成; 本文由郭媛媛与任锋写作完成; 张桓虎与段钟平审校.
通讯作者: 张桓虎, 主任医师, 030001, 山西省太原市五一路382号, 山西医科大学第二临床医学院. zhhh31@163.com
电话: 0351-3365000
收稿日期: 2014-08-26
修回日期: 2014-10-15
接受日期: 2014-11-05
在线出版日期: 2014-12-18
Abstract

目的: 在体外条件下, 探讨山奈酚对内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)诱导人正常肝细胞株HL-7702细胞凋亡的保护作用以及机制.

方法: 通过ERS诱导剂衣霉素(tunicamycin, TM)诱导HL-7702细胞发生凋亡, 建立肝细胞损伤模型, 以不同浓度的山奈酚干预HL-7702细胞. 分别采用倒置显微镜观察细胞形态学变化; 采用MTT法检测细胞存活率; 采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活力定量测定试剂盒测定细胞上清液LDH活性; 采用流式细胞术检测细胞凋亡率; 同时采用免疫印迹法检测ERS相关凋亡相关蛋白CHOP的表达情况.

结果: 与TM诱导的肝细胞凋亡组相比, 低浓度山奈酚(0.01、0.10、1.00 μmol/L)显著抑制ERS诱导的肝细胞凋亡, 但随着浓度升高其保护作用减弱, 包括改善细胞形态, 增加肝细胞的存活率(TM模型组80.14%±8.00%, 不同浓度山奈酚干预组分别为96.16%±10.00%, P<0.01; 91.43%±9.10%, P<0.01; 87.84%±6.90%, P<0.01), 减少了HL-7702细胞释放LDH(TM模型组398.5 U±30.8 U, 不同浓度山奈酚干预组分别为89.9 U±21.4 U, P<0.05; 95.1 U±8.9 U, P<0.05; 120.5 U±24.2 U, P<0.05), 减少HL-7702细胞的凋亡率(TM模型组4.58%±0.90%, 不同浓度山奈酚干预组分别为1.18%±0.48%, P<0.05; 1.97%±0.32%, P<0.05; 2.63%±0.16%, P<0.05), 并显著下调ERS特异性凋亡蛋白CHOP的表达.

结论: 低浓度山奈酚可能通过抑制CHOP的表达保护ERS诱导的肝细胞凋亡HL-7702细胞, 因此应用山奈酚可能为肝病所引发的肝损伤提供新的干预措施.

Keywords: 山奈酚; 内质网应激; 细胞凋亡; 机制

核心提示: 深入探讨山奈酚对内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)诱导正常肝细胞凋亡的作用, 证实山奈酚对ERS诱导细胞凋亡的保护作用, 并阐明低浓度山奈酚对细胞凋亡具有更好保护作用; 此外, 山奈酚通过抑制CHOP分子改善ERS诱导细胞凋亡.