Published online 2014-12-08. doi: 10.11569/wcjd.v22.i34.5249
修回日期: 2014-10-14
接受日期: 2014-10-29
在线出版日期: 2014-12-08
目的: 观察砷暴露肝纤维化大鼠肝组织中微小RNA(microRNA, miRNA)-21和Smad7的表达情况, 探讨丹芍化纤胶囊预防砷暴露所致肝纤维化的可能机制.
方法: 将75只♂SD大鼠随机分为5组, 即空白对照组(A组)、砷暴露模型组(B组)、扶正化瘀胶囊预防组(C组)、丹芍化纤胶囊低剂量预防组(D组)、丹芍化纤胶囊高剂量预防组(E组), 每组15只. 各组大鼠自由饮水, 其中A组饮用自来水, B-E组饮用含亚砷酸钠(NaAsO2)100 mg/L水. 同时, C组大鼠予扶正化瘀胶囊(0.8 g/kg), D组予丹芍化纤胶囊(0.5 g/kg), E组予丹芍化纤胶囊(1.0 g/kg)分别灌胃, 2次/d, 5 d/wk, 共16 wk. 全自动生化分析仪测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)活性, ELISA法检测肝匀浆透明质酸(hyaluronic acid, HA)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)的水平, HE及Masson染色法观测肝组织病理改变, RT-PCR法检测肝组织miRNA-21与Smad7 mRNA的表达, 免疫组织化学法及Western blot检测肝组织Smad7蛋白的表达.
结果: 与A组比较, B-E组大鼠血清ALT、AST, 肝匀浆HA、TGF-β1显著升高, 但C、D、E组显著低于B组(F = 129.159、291.878、5316.239、1269.287, P<0.01). B组大鼠肝脏可见明显病理改变甚至肝纤维化形成, 而C、D、E组肝脏病变及肝纤维化程度显著轻于B组(F = 62.832、68.112, P<0.05或P<0.01). 与A组比较, B-E组大鼠肝组织miRNA-21显著升高, 但C、D、E组显著低于B组(F = 552.231, P<0.01). 与A组比较, B-E组大鼠肝组织Smad7 mRNA与蛋白的表达均显著降低, 但C、D、E组显著高于B组(F = 129.512、68.249、43.435, P<0.05或P<0.01).
结论: 饮水砷暴露16 wk可导致大鼠肝功能受损甚至引起肝纤维化, 其机制可能与上调miRNA-21、下调Smad7的表达有关, 丹芍化纤胶囊对砷暴露致大鼠肝纤维化有潜在的预防作用, 可能通过下调miRNA-21、上调Smad7而实现.
核心提示: 目前, 临床上较为理想的肝纤维化防治药物不多, 尤其是针对贵州地区砷中毒所致慢性肝病的防治, 仍处于探索阶段. miRNA-21很可能是本课题组新发现的丹芍化纤胶囊的药物作用靶点, 有望成为抗肝纤维化药物作用的靶标及疗效评价指标, 本研究结果对该药防治砷中毒所致肝纤维化的机制探讨及临床应用具有一定的指导意义.