基础研究
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世界华人消化杂志. 2014-01-28; 22(3): 319-326
Published online 2014-01-28. doi: 10.11569/wcjd.v22.i3.319
基于耐药特性联合单细胞培养识别肝癌干细胞克隆亚群
陈娟, 区泳芳, 蔡捷, 陶璐, 陈相宜, 邝晓聪
陈娟, 区泳芳, 蔡捷, 陶璐, 邝晓聪, 广西医科大学病理与病理生理教研室 广西壮族自治区南宁市 530021
陈相宜, 广西医科大学生理教研室 广西壮族自治区南宁市 530021
陈娟, 硕士, 主要从事癌干细胞的研究.
基金项目: 广西自然科学基金资助项目, Nos. 桂科自0991139, 2013GXNSFAAO19244; 广西科学研究与技术开发计划基金资助项目, No. 桂科攻0993003C-1.
作者贡献分布: 本文由陈娟撰写; 邝晓聪负责实验设计; 区泳芳、蔡捷、陶璐及陈相宜负责实验数据的收集和整理.
通讯作者: 邝晓聪, 副教授, 硕士生导师, 530021, 广西南宁市双拥路22号, 广西医科大学病理与病理生理教研室. 1609800049@qq.com
电话: 0771-5358502
收稿日期: 2013-09-30
修回日期: 2013-11-21
接受日期: 2013-12-05
在线出版日期: 2014-01-28
Abstract

目的: 基于癌干细胞的耐药特性联合单细胞培养方法识别肝癌干细胞所在的克隆亚群.

方法: 以BEL-7404细胞系为研究对象, 裸鼠体内移植瘤形成实验, 并予阿霉素(adriamycin, ADM)8 mg/kg干预, 待肿瘤直径为1.5 cm时取移植瘤细胞做原代培养, 并在裸鼠体内连续传代4代, 并将第4代移植瘤细胞命名为"BEL-7404-ADM-P4", 根据成瘤时间检测肝癌干细胞富集情况. 联合单细胞培养, 取BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4所形成的克隆根据克隆形态分为全克隆、部分克隆、旁克隆, 检测BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的癌干特性, 即增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率; 取其全克隆、部分克隆、旁克隆做hoechst33342染色, 并在共聚焦显微镜下观察其染色情况; 根据BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率以及hoechst33342染色情况识别癌干细胞所在的克隆亚群.

结果: 裸鼠体内低剂量阿霉素干预, 在体内连续成瘤传代过程中, 裸鼠皮下移植瘤成瘤率均为100%, 且成瘤时间从第一代到第四代均有所缩短, 以此达到了肝癌干细胞的初步富集; 增殖能力: 全克隆增殖速度最快, 细胞量最大, 部分克隆次之, 旁克隆增殖速度最慢, 并于第10天开始出现细胞皱缩死亡; 克隆形成率: BEL-7404-ADM-P4-H高于BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4-M, 差异有统计学意义(P<0.05); 悬浮球形成率: 仅BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H可形成悬浮球, 其余细胞系不形成悬浮球, 而BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H悬浮球形成率比较, 无统计学意义(P>0.05); BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342染色情况: BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆都有极少数不染和低染的细胞存在, 但部分克隆、旁克隆全染, 且BEL-7404单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342荧光强度均强于BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆.

结论: 基于癌干细胞的耐药特性联合单细胞培养方法所形成的克隆亚群中, 全克隆含有更高比例的肝癌干细胞.

Keywords: 阿霉素干预; 肝癌干细胞; 单细胞培养; 全克隆; 部分克隆; 旁克隆

核心提示: 近几年, 研究者们通过单细胞克隆培养法分离癌干细胞, 研究者们认为全克隆细胞群富含癌干细胞, 本文首次将癌干细胞的耐药特性和单细胞克隆方法相结合, 以识别富含肝癌干细胞的克隆亚群, 以期为临床针对肝癌干细胞的治疗提供坚实的实验基础.