基础研究
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世界华人消化杂志. 2014-10-18; 22(29): 4379-4385
Published online 2014-10-18. doi: 10.11569/wcjd.v22.i29.4379
分泌型卷曲相关蛋白重组腺病毒载体对小鼠肝纤维化的抑制作用
毕婉蓉, 杨长青, 邢海林
毕婉蓉, 同济大学附属同济医院分院消化科 上海市 200092
杨长青, 同济大学附属同济医院消化内科 上海市 200065
邢海林, 同济大学附属同济医院普外科 上海市 200065
毕婉蓉, 副主任医师, 主要从事肝纤维化的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 8107034; 上海市同济医院横向基金资助项目, No. HX1401.
作者贡献分布: 毕婉蓉与杨长青对此文所作贡献均等; 此课题由毕婉蓉与杨长青设计; 研究过程由毕婉蓉与邢海林操作完成; 研究所用新试剂与分析工具由杨长青提供; 数据分析由毕婉蓉完成; 本论文写作由毕婉蓉完成.
通讯作者: 杨长青, 教授, 主任医师, 博士生导师, 200065, 上海市普陀区新村路389号, 同济大学附属同济医院消化内科. cqyang@tongji.edu.cn
电话: 021-65981346
收稿日期: 2014-08-06
修回日期: 2014-08-22
接受日期: 2014-09-03
在线出版日期: 2014-10-18
Abstract

目的: 成功构建携带分泌型卷曲相关蛋白(secreted frizzled related protein, SFRP)基因的腺病毒载体, 并探讨SFRP对实验性小鼠肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)的抑制作用.

方法: 用脂质体转染法将重组腺病毒pAd-Track-PPARγ2-CMV和SFRP5基因共转染CCl4诱导小鼠HF模型肝细胞, 成功构建的重组腺病毒Ad-SFRP5感染HF细胞. 采用Western blot、免疫荧光显微镜及激光共聚焦定位分析观察Ad-SFRP5抑制HF作用.

结果: 感染的重组腺病毒载体在小鼠HF细胞中有较高的SFRP5蛋白的稳定表达. 免疫双荧光显示Ad-SFRP5抑制HF小鼠肝细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和成纤维细胞特异蛋白-1(fibroblast-specific protein-1, FSP-1)的表达. 病理检测支持Ad-SFRP5抑制HF小鼠肝细胞上皮-间质转换(epithelial-mesenchymal transitions, EMT)的发生(SFRP5处理组与正常对照组相比, P<0.05).

结论: 我们成功构建含有小鼠SFRP5基因的重组腺病毒, 他可有效提高小鼠HF细胞中SFRP5基因的表达水平, 并可抑制EMT程序, 从而抑制HF.

Keywords: 腺病毒; 肝纤维化; 分泌型卷曲相关蛋白

核心提示: 本实验利用pAd-Easy腺病毒载体系统, 通过PCR扩增分泌型卷曲相关蛋白(secreted frizzled related protein, SFRP)基因, 克隆到腺病毒载体pAd-Easy共转染肝病纤维化(hepatic fibrosis, HF)细胞, 构建携带SFRP5基因的重组腺病毒, 在体外感染小鼠HF细胞, 以观察SFRP5基因表达情况及对HF的抑制现象.