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世界华人消化杂志. 2014-09-08; 22(25): 3796-3800
Published online 2014-09-08. doi: 10.11569/wcjd.v22.i25.3796
Published online 2014-09-08. doi: 10.11569/wcjd.v22.i25.3796
利用生物素-链亲和素系统筛选重症急性胰腺炎肝损伤大鼠HMGB1启动子结合蛋白
杨莉, 王红梅, 贵阳医学院生理学教研室 贵州省贵阳市 550004
张仕荣, 贵阳市金阳医院病理检验科 贵州省贵阳市 550023
周晓东, 南昌大学第一附属医院消化科 江西省南昌市330006
杨莉, 讲师, 主要从事基因转录调控的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81160307.
作者贡献分布: 此课题由杨莉与周晓东设计; 动物模型制作与末端带biotin标记的HMGB1启动子探针扩增由杨莉完成; 肝脏组织细胞核蛋白提取物制备、DNA pull-down分析及质谱鉴定结果分析由张仕荣与王红梅操作完成; 论文写作由杨莉与周晓东完成.
通讯作者: 周晓东, 副教授, 副主任医师, 330006, 江西省南昌市永外正街17号, 南昌大学第一附属医院消化科. yfyzxd@163.com
电话: 0791-88692505
收稿日期: 2014-05-11
修回日期: 2014-06-18
接受日期: 2014-07-15
在线出版日期: 2014-09-08
修回日期: 2014-06-18
接受日期: 2014-07-15
在线出版日期: 2014-09-08
Abstract
目的: 筛选重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)肝损伤大鼠高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1, HMGB1)的启动子结合蛋白.
方法: 牛黄胆酸钠胆胰管逆行注射法制备SAP大鼠模型, 与对照组同时处死, 取肝组织提取细胞核蛋白, PCR扩增末端带生物素标记的HMGB1启动子探针, 将核蛋白与HMGB1探针孵育, 然后用链亲和素磁珠分离HMGB1启动子-蛋白复合物, 分别用0.25 mol/L和1 mol/L NaCl洗脱探针上结合的蛋白, 用SDS-PAGE电泳分离样本蛋白, SilverQuest银染试剂染色, 比较SAP组和对照组的差异条带并做质谱鉴定.
结果: 对照组和SAP组共有14条差异条带, 质谱鉴定这些差异条带得到H2A、H2B、H3、H4、S100A9转录相关蛋白.
结论: 该研究筛选到一些SAP肝损伤特异性的HMGB1启动子结合蛋白, 对于下一步研究HMGB1在SAP肝损伤过程中的转录调控机制具有重要意义.
Keywords: 高迁移率组蛋白B1; 重症急性胰腺炎; 启动子; 生物素-链亲和素
核心提示: 以重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)肝损伤大鼠为研究模型, 结合生物素-链亲和素系统, 从"组学"的角度和活体组织水平, 筛选了SAP肝损伤大鼠肝脏中参与高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1)基因表达调控的蛋白分子, 并对其中的重要调节分子进行了质谱鉴定和深入研究.