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世界华人消化杂志. 2014-08-28; 22(24): 3608-3612
Published online 2014-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v22.i24.3608
Published online 2014-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v22.i24.3608
HPV18 E6、E7基因-shRNA重组腺病毒表达载体的构建及鉴定
李钢, 邓彦超, 李德生, 居来提·艾尼瓦尔, 张力为, 新疆医科大学第一附属医院胸外科 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830054
冯彪, 泰安市中心医院胸外科 山东省泰安市 271000
李钢, 在读硕士, 主要从事食管癌的基础与临床研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30960383.
作者贡献分布: 此课题的设计和论文写作由李钢与张力为完成; 研究过程由李钢与冯彪操作完成; 数据分析由李钢、冯彪、邓彦超、李德生、张力为及居来提·艾尼瓦尔完成.
通讯作者: 张力为, 教授, 主任医师, 830054, 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市鲤鱼山南路137号, 新疆医科大学第一附属医院胸外科. zhangliwei@medmail.com.cn
电话: 0991-4361528
收稿日期: 2014-04-30
修回日期: 2014-06-09
接受日期: 2014-07-05
在线出版日期: 2014-08-28
修回日期: 2014-06-09
接受日期: 2014-07-05
在线出版日期: 2014-08-28
Abstract
目的: 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)18型E6、E7基因的短发夹RNA(short hairpin ribonucleic acid, shRNA)重组腺病毒载体, 为探讨食管癌与其发病关系的研究提供实验基础.
方法: 设计并合成2条shRNA均克隆到PL-Dest腺病毒骨架载体(pAd/PL-Dest)之中, 分别组成HPV18 E6、HPV18 E7基因重组腺病毒基因沉默子(shpAd-E6-eGFP、shpAd-E7-eGFP). 然后对重组腺病毒基因沉默子(shpAd-E6-eGFP、shpAd-E7-eGFP)采用酶切、DNA测序、PCR鉴定. 将验证后的沉默子经酶切后转染至HEK293A细胞, 然后再行包装、扩增、纯化与病毒滴度测定.
结果: 酶切鉴定得到阳性shpAd-E6-eGFP、shpAd-E6-eGFP重组腺病毒质粒; 转染到HEK293A细胞包装成功.
结论: 成功构建了HPV18 E6、HPV18 E7基因的shRNA重组腺病毒载体, 为HPV相关食管癌的基因治疗研究提供实验基础.
Keywords: 食管癌; RNA干扰; 腺病毒; 人乳头瘤病毒
核心提示: 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus)18 E6、E7基因的短发夹RNA(short hairpin ribonucleic acid)重组腺病毒载体, 为探讨食管癌与其发病关系的研究及RNA干扰沉默食管癌细胞株中对人类白细胞抗原类分子的影响提供实验基础.