基础研究
Copyright ©The Author(s) 2014. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2014-08-18; 22(23): 3396-3402
Published online 2014-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v22.i23.3396
shRNA干预IGF-ⅠR活化对肝癌细胞增殖的抑制作用
严晓娣, 时运, 钱琦, 李景源, 陈心, 董志珍, 姚登福
严晓娣, 时运, 钱琦, 李景源, 陈心, 董志珍, 姚登福, 南通大学附属医院临床医学研究中心 江苏省南通市 226001
严晓娣, 主要从事肿瘤的临床诊断和肿瘤发病机制的研究.
基金项目: 国家国际科技合作专项基金资助项目, No. 2013DFA32150; 江苏省临床医学科技专项基金资助项目, No. BL2012053; 南通市社会事业科技创新与示范基金资助项目, No. HS2012039.
作者贡献分布: 方法研究、数据整理及文章起草由严晓娣与时运完成; 资料与动物模型由时运完成; 钱琦、李景源及陈心参加完成部分研究; 统计分析由严晓娣完成; 设计、论文修改及审阅由董志珍与姚登福完成.
通讯作者: 姚登福, 教授, 226001, 江苏省南通市西寺路20号, 南通大学附属医院临床医学研究中心. yaodf@ahnmc.com
电话: 0513-85052297 传真: 0513-85052254
收稿日期: 2014-05-01
修回日期: 2014-06-02
接受日期: 2014-06-06
在线出版日期: 2014-08-18
Abstract

目的: 观察干扰胰岛素样生长因子-Ⅰ型受体(insulin-like growth factor-Ⅰ receptor, IGF-ⅠR)表达对肝癌(PLC/PRF/5及Bel-7404)细胞增殖、周期、凋亡的影响及联合抗癌、靶向药物抑制细胞增殖的协同作用.

方法: 设计与合成多条针对IGF-ⅠR序列的shRNA, 插入pGPU6/GFP/Neo载体, 构建、转染肝癌细胞株、筛选高效质粒, 观察沉默IGF-ⅠR表达对肝癌细胞增殖的抑制作用与机制.

结果: 4对构建IGF-ⅠR-shRNA经筛选以shRNA4干扰效果最佳且具特异性; 以shRNA4转染效率PLC/PRF/5细胞为71%和Bel-7404细胞为90%; 在mRNA水平上抑制率前者为59.6%±2.8%, 后者为54.9%±2.6%; 蛋白水平上IGF-ⅠR表达均同步减少; 转染72 h后, PLC/PRF/5细胞增殖抑制率为63.87%±3.90%(t = 19.244, P<0.001)及Bel-7404细胞为61.47%±1.70%(t = 5.493, P<0.005), 均呈时间依赖性, 且增殖周期发生G1期阻滞, 细胞周期蛋白(CyclinD1)表达受抑, 细胞凋亡增加; shRNA4增加肝癌细胞对靶向药物索拉非尼及化疗药物奥沙利铂的敏感性.

结论: 下调IGF-ⅠR基因转录可抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡, 改善肝癌细胞对靶向药物及化疗药物敏感性, 提示IGF-ⅠR有望成为肝癌基因治疗的有效靶点.

Keywords: 肝细胞肝癌; 胰岛素样生长因子-Ⅰ受体; 短发夹RNA; 基因沉默

核心提示: 构建含有干扰作用表达载体, 以RNAi技术干扰胰岛素样生长因子-Ⅰ型受体(insulin-like growth factor-Ⅰ receptor, IGF-ⅠR), 经动物移植瘤模型研究, 探讨IGF-ⅠR干扰对肝细胞恶性转化的调控作用, 在转录水平上直接调控肝癌转移关键基因的表达, 可达到基因治疗和药物增敏效果.