基础研究
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世界华人消化杂志. 2014-08-08; 22(22): 3194-3200
Published online 2014-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v22.i22.3194
稳定沉默CD14胃腺癌SGC-7901细胞体系的构建
张涛, 曹火留, 罗淑娟, 郑东林, 陈远能
张涛, 曹火留, 罗淑娟, 郑东林, 陈远能, 广西中医药大学附属瑞康医院消化科 广西壮族自治区南宁市 530011
张涛, 副研究员, 主要从事中西医结合防治消化系疾病的研究.
基金项目: 国家自然基金资助项目, No. 81360531; 广西自然基金资助项目, No. 2010GXNSFA013219; 广西卫生厅重点基金资助项目, No. 重2012030.
作者贡献分布: 陈远能负责课题设计与项目总体实施; 张涛与曹火留负责病毒滴定与转染; 罗淑娟与郑东林负责数据分析与结果整理; 张涛与陈远能对本文贡献一致.
通讯作者: 陈远能, 教授, 530011, 广西壮族自治区南宁市华东路10号, 广西中医药大学附属瑞康医院消化科. 327664246@qq.com
收稿日期: 2014-04-17
修回日期: 2014-06-18
接受日期: 2014-06-19
在线出版日期: 2014-08-08
Abstract

目的: 观察CD14-shRNA慢病毒载体转染SGC-7901细胞后CD14 mRNA及蛋白变化, 为胃癌发病机制的研究奠定实验基础.

方法: 将构建好的CD14-shRNA慢病毒载体, 转染SGC-7901细胞后, 用Real-time PCR和Western blot分别检测空白对照组、NC-CD14 shRNA阴性对照组及CD14-shRNA慢病毒载体组的CD14 mRNA和蛋白质的表达.

结果: CD14-shRNA慢病毒载体成功转染至胃癌细胞系, RT-PCR结果显示转染CD14-shRNA慢病毒组CD14的2Ct值(1±0.08)比NCshRNA对照组2Ct值(0.16±0.02)降低(P = 0.0001; P<0.001), 差异有统计学意义; Western blot检测结果显示, CD14-shRNA慢病毒组CD14蛋白相对表达量为0.01, 远远小于SGC-7901空白组(1.00)及NCshRNA阴性对照组(0.83).

结论: CD14-shRNA慢病毒载体转染至胃癌 SGC-7901细胞后能抑制胃癌细胞CD14 mRNA及蛋白表达, CD14在胃癌发生、发展中具有重要作用, 有望为胃癌防治提供新的思路.

Keywords: CD14-shRNA; 慢病毒载体; 胃癌; SGC-7901细胞系

核心提示: 采用shRNA技术构建稳定沉默CD14的人胃癌SGC-7901细胞体系, CD14在胃癌发生、发展中具有重要作用, 有望为胃癌防治提供新的思路.