研究快报
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世界华人消化杂志. 2014-07-08; 22(19): 2752-2757
Published online 2014-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v22.i19.2752
慢病毒表达载体的构建及沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达
白璇, 唐慧, 郎丰超, 郭强
白璇, 郭强, 昆明医科大学 云南省第一人民医院(昆明医科大学附属昆华医院)消化内科 云南省昆明市 650032
唐慧, 云南省第一人民医院(昆明医科大学附属昆华医院)临床基础医学研究所 云南省昆明市 650032
郎丰超, 中国科学院昆明动物研究所 云南省昆明市 650032
白璇, 在读硕士, 主要从事消化系肿瘤分子机制的基础研究和消化内镜的临床应用.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81260323; 云南省科技厅-昆明医科大学联合基金资助项目, No. 2012FB095; 昆明医科大学研究生创新基金资助项目, No. 2012J004; 云南省中青年学术技术带头人后备人才培养基金资助项目, No. 2013HB083.
作者贡献分布: 此课题由郭强与唐慧设计; 研究过程由白璇操作完成; 唐慧负责实验指导; 郎丰超负责FOXQ1 shRNA的设计; 郭强与唐慧负责论文指导与修改; 论文写作由白璇完成.
通讯作者: 郭强, 教授, 主任医师, 650032, 云南省昆明金碧路157号, 云南省第一人民医院(昆明医科大学附属昆华医院)消化内科. gqkj003@sina.com
电话: 0871-63638772 传真: 0871-63648772
收稿日期: 2014-03-28
修回日期: 2014-04-17
接受日期: 2014-04-28
在线出版日期: 2014-07-08
Abstract

目的: 构建FOXQ1基因shRNA慢病毒干扰系统, 沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达.

方法: 根据FOXQ1基因的序列, 设计合成3对shRNA干扰序列, 退火后连接到载体质粒PLKO.1-puro, 将重组质粒转化至STBl3感受态中, 涂板培养挑取单菌落, 摇菌后小提质粒, 选取酶切及测序鉴定正确的重组质粒去内毒素大提, 将质粒与辅助包装质粒pRSV-rev、pMDlg-pRRE和pCMV-VSV-G利用磷酸钙法共转染293-T细胞, 收集病毒上清, 感染目的细胞DLD-1, 嘌呤霉素筛选FOXQ1沉默细胞, 经荧光定量PCR及Western blot检测干扰效果.

结果: 酶切及测序结果显示shRNA成功插入载体PLKO.1-puro中, 共转染293-T细胞成功获取病毒上清, 感染DLD1细胞, 经嘌呤霉素筛选出FOXQ1沉默细胞, 荧光定量PCR及Western blot鉴定FOXQ1基因表达最高抑制率为90.4%.

结论: 通过构建FOXQ1基因shRNA慢病毒干扰系统, 成功获取FOXQ1基因沉默细胞. 为后续FOXQ1基因在肿瘤发生发展的研究奠定实验基础.

Keywords: FOXQ1基因; 慢病毒载体; RNA干扰; 基因沉默

核心提示: 研究FOXQ1(forkhead box Q1)基因在大肠癌肿瘤生成中的功能及其分子机制, 有望发现FOXQ1基因在大肠癌发生发展中涉及的相关信号通路及其下游靶分子, 为人类大肠癌基因诊治提供新思路.