基础研究
Copyright ©The Author(s) 2012. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2014-06-28; 22(18): 2532-2538
Published online 2014-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v22.i18.2532
结直肠癌中AEG-1对血管生成相关因子HIF-1α和miR-34a的影响
黄素军, 吴斌文, 李东风, 刘宝龙, 邓罡, 张凯军
黄素军, 刘宝龙, 南方医科大学 广东省广州市 510515
黄素军, 吴斌文, 李东风, 刘宝龙, 邓罡, 张凯军, 广东省人民医院 广东省医学科学院 广东省广州市 510080
黄素军, 在读硕士, 主要从事消化系恶性肿瘤的研究.
基金项目: 广东省自然科学基金资助项目, No. 10151008008000005; 广东省科技计划基金资助项目, Nos. 2011B031800001, 2011B031800004.
作者贡献分布: 课题由吴斌文与黄素军设计; 研究过程由黄素军、李东风及刘宝龙完成; 数据分析由邓罡与张凯军完成; 本论文写作由黄素军与吴斌文完成.
通讯作者: 吴斌文, 主任医师, 博士, 510080, 广东省广州市中山二路106号, 广东省人民医院, 广东省医学科学院. wubinwengd@aliyun.com
电话: 020-83827812-51050
收稿日期: 2014-05-29
修回日期: 2014-06-11
接受日期: 2014-06-13
在线出版日期: 2014-06-28
Abstract

目的: 构建携带星形胶质细胞升高基因-1(astrocyte elevated gene-1, AEG-1)的慢病毒载体并进行慢病毒包装, 感染结直肠癌SW1116细胞建立稳定株, 检测AEG-1改变后对血管生成相关因子缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)和miR-34a表达的影响.

方法: 采用Western blot方法筛选合适的结直肠癌细胞株; 构建携带AEG-1的慢病毒载体, 经PCR筛选阳性克隆及测序鉴定后, 用psPAX、pMD2.G慢病毒包装系统共转染包装细胞293FT, 包装产生慢病毒, 用以感染筛选出来的结肠癌细胞, 细胞提取mRNA和蛋白进行qRT-PCR和Western blot分析验证细胞模型建立是否成功. 分别采用qRT-PCR和Western blot检测miR-34a和HIF-1α在AEG-1转染前后的表达变化情况.

结果: 蛋白质印迹结果显示SW1116在7个结直肠癌中的表达量最低(P<0.05); 成功构建AEG-1的慢病毒载体, 对结肠癌SW1116细胞株AEG-1表达的上调作用显著(0.53±0.44 vs 2.02±0.22, P<0.05; 0.71±0.14 vs 2.02±0.22, P<0.05), 上调AEG-1的表达会抑制miR-34a(P<0.01)和促进HIF-1α(P<0.01)的表达.

结论: 成功构建AEG-1慢病毒载体, AEG-1在结直肠癌中可以抑制血管生成相关因子miR-34a和促进HIF-1α的表达, 我们推测AEG-1可能通过抑制miR-34a促进HIF-1α的表达, 从而发挥促进肿瘤血管新生的作用.

Keywords: 星形胶质细胞升高基因-1; miR-34a; 缺氧诱导因子-1α; 慢病毒; 结直肠癌

核心提示: 本文展示了成功构建星形胶质细胞升高基因-1(astrocyte elevated gene-1, AEG-1)慢病毒载体并转染结直肠癌细胞株的过程, 并采用qRT-PCR和Western blot证实了AEG-1可以抑制miR-34a和促进缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)的表达, 结合国外文献, 推测AEG-1在结直肠癌中可能通过抑制miR-34a, 促进HIF-1α, 从而发挥促进肿瘤血管新生的作用.