基础研究
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世界华人消化杂志. 2014-05-18; 22(14): 1936-1942
Published online 2014-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v22.i14.1936
幽门螺杆菌菌毛蛋白FLaA IgY的制备及体外抑菌实验
彭姣, 卢超, 祁振强, 张国海
彭姣, 卢超, 祁振强, 张国海, 深圳市宝舜泰生物医药股份有限公司 广东省深圳市 518057
卢超, 张国海, 广西师范大学药用资源化学与药物分子工程国家重点实验室培育基地 广西壮族自治区桂林市 541004
彭姣, 工程师, 主要从事抗体的研究.
基金项目: 广西自然科学基金资助项目, No. 2013GXNSFBA019159; 广西医药产业人才小高地基金资助项目, No. 1312; 广西科学研究与技术开发基金资助项目, No. 13349002; 深圳市科创委深圳市战略性新兴产业发展专项基金资助项目, No. CXZZ20120823103224373.
作者贡献分布: 此课题由张国海与祁振强设计; 实验部分由卢超与彭姣完成; 论文写作由彭姣与张国海完成.
通讯作者: 张国海, 助理研究员, 541004, 桂林市育才路15号, 广西师范大学药用资源化学与药物分子工程国家重点实验室培育基地. zgh1207@mailbox.gxun.edu.cn
电话: 0773-2120958
收稿日期: 2014-02-17
修回日期: 2014-03-23
接受日期: 2014-04-03
在线出版日期: 2014-05-18
Abstract

目的: 制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)菌毛蛋白FlaA卵黄免疫球蛋白(yolk immunoglobulin, IgY), 并进行体外抑菌实验, 为治疗H. pylori口服药物的研发奠定基础.

方法: 采用原核表达制备的FlaA蛋白, 将重组FlaA菌毛蛋白免疫蛋鸡获取FlaA IgY, 采用间接ELISA的方法检测FlaA IgY的效价. 通过将其与肠道中常见菌群乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌进行抗体抗原结合反应, 检测其是否与肠道中其他菌群存在交叉反应. 评价0.1、1、5 mg/mL低、中、高3种不同浓度的FlaA IgY的体外抑菌实验效果.

结果: 纯化后的FlaA蛋白浓度为2.97 mg/mL. 经重组FlaA IgY免疫制备IgY在第3次免疫1 wk后效价可达到1:12800, 特异性检测结果显示, FlaA IgY不与肠道中常见菌发生交叉反应, 与H. pylori全菌和重组FlaA反应强烈. 体外抑菌结果显示, 0.1、1、5 mg/mL的FlaA IgY处理后的H. pylori菌液浓度与对照组菌液浓度相比具有显著差异(0.324±0.033, 0.078±0.012, 0.014±0.003 vs 0.539±0.023, P<0.01), 表明低、中、高3组浓度的FlaA IgY均能一定程度的抑制H. pylori的生长. 0.1 mg/mL IgY的抑菌作用主要表现在1-6 h之间, 6 h后抑菌作用基本丧失. 1 mg/mL FlaA IgY处理组的H. pylori在1-24 h之间生长较为缓慢, 5 mg/mL FlaA IgY处理组菌液浓度在1-24 h之间基本无变化. 108 CFU/mL H. pylori经3组不同浓度FlaA IgY处理24 h后, 低IgY浓度组菌液浓度与其余2组菌液浓度相比差异显著(0.078±0.012, 0.014±0.003 vs 0.324±0.033, P<0.01), 5 mg/mL FlaA IgY在24 h内能彻底抑制H. pylori的生长.

结论: 制备的FlaA IgY效价较高, 特异性强, 不与肠道常见菌群发生交叉反应. 5 mg/mL的FlaA IgY在体外对H. pylori具有很强的抑制作用.

Keywords: 幽门螺杆菌; 菌毛蛋白FlaA; 卵黄抗体; 抑菌试验

核心提示: 采用重组幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)菌毛蛋白FlaA为免疫抗原制备卵黄抗体, 该卵黄抗体效价高, 特异性强, 不会与肠道常见菌群发生交叉反应, 在体外能有效抑制H. pylori的生长.