研究快报
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世界华人消化杂志. 2014-04-08; 22(10): 1423-1430
Published online 2014-04-08. doi: 10.11569/wcjd.v22.i10.1423
5'-Aza-CdR对HT-29和LoVo结直肠癌细胞株中CDX2基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响
许春伟, 葛畅, 王鲁平, 方园, 张玉萍
许春伟, 葛畅, 王鲁平, 方园, 张玉萍, 中国人民解放军北京军区总医院病理科 北京市 100700
许春伟, 助理研究员, 主要从事胃肠道肿瘤的临床与基础研究.
基金项目: 首都卫生发展科研专项基金资助项目, No. 2011-5021-02.
作者贡献分布: 主要实验、资料分析、统计及文章撰写由许春伟完成; 研究设计、文章修改及审阅由王鲁平完成; 资料分析、样本处理及生物信息学分析由葛畅、方园及张玉萍完成.
通讯作者: 王鲁平, 教授, 研究员, 主任医师, 博士生导师, 100700, 北京市东城区东四十条南门仓5号, 中国人民解放军北京军区总医院病理科. bzwlp@yahoo.com
收稿日期: 2014-01-27
修回日期: 2014-02-21
接受日期: 2014-02-28
在线出版日期: 2014-04-08
Abstract

目的: 探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine, 5'-Aza-CdR)对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中CDX2基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响.

方法: 用不同浓度5'-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo. 应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验(Western blot)检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中CDX2基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达.

结果: Methylight检测HT-29和LoVo细胞中CDX2蛋白在药物作用异常甲基化未得到逆转; 实时荧光定量PCR和Western blot检测到0.5、1.0、1.5 μmol/L 5'-Aza-CdR处理后CDX2基因mRNA和蛋白重新表达, 实时荧光定量PCR检测对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株mRNA相对表达量分别为1.000±0.000、0.973±0.024、1.014±0.019和1.094±0.020; 在LoVo细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、0.966±0.038、1.050±0.029和1.007±0.019. Western blot检测CDX2蛋白在对照组和不同浓度实验组中HT-29细胞株相对表达量分别为0.454±0.049、0.501±0.041、0.340±0.050和0.531±0.046; LoVo细胞株相对表达量分别为0.527±0.037、0.415±0.037、0.432±0.040和0.626±0.046. 以上作用无时间、剂量依赖性, 但CDX2基因mRNA在HT-29细胞株表达(F = 25.146, P = 0.000)和LoVo细胞株表达(F = 5.470, P = 0.024)具有统计学差异, CDX2蛋白表达在HT-29细胞株表达(F = 9.700, P = 0.005)和LoVo细胞株表达(F = 17.701, P = 0.001)亦具有统计学差异.

结论: 结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中CDX2基因mRNA和蛋白表达不受中DNA甲基化的表观遗传修饰的调控.

Keywords: DNA甲基化; 5'-氮杂-2'-脱氧胞苷; HT-29; LoVo; CDX2基因

核心提示: 提示不同组织肿瘤中CDX2(caudal type homeobox transcription factor 2)表达有异质性, CDX2在CRC中与食管癌和胃癌中的沉默机制不同, 结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中CDX2基因mRNA和蛋白表达不受中DNA甲基化的表观遗传修饰的调控.