基础研究
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世界华人消化杂志. 2013-03-28; 21(9): 754-760
Published online 2013-03-28. doi: 10.11569/wcjd.v21.i9.754
下调paxillin高表达对结直肠癌细胞SW480细胞信号转导及超微结构的影响
郑建伟, 尹洪芳, 汪欣, 刘玉村, 万远廉, 朱静
郑建伟, 汪欣, 刘玉村, 万远廉, 北京大学第一医院普外科 北京市 100034
尹洪芳, 北京大学第一医院病理科 北京市 100034
朱静, 北京大学第一医院外科实验室 北京市 100034
郑建伟, 博士, 主要从事胃肠肿瘤发生发展分子生物学机制的研究.
作者贡献分布: 本课题由郑建伟完成; 研究过程由郑建伟、尹洪芳及朱静操作完成; 数据分析由郑建伟与尹洪芳完成; 论文写作由郑建伟完成; 汪欣指导课题的设计; 刘玉村与万远廉指导课题的开展.
通讯作者: 汪欣, 副教授, 主任医师, 100034, 北京市西城区西什库大街8号, 北京大学第一医院普外科. wangxin_guo@hotmail.com
电话: 010-83572430
收稿日期: 2013-02-03
修回日期: 2013-03-05
接受日期: 2013-03-08
在线出版日期: 2013-03-28
Abstract

目的: 探讨下调paxillin高表达对结直肠癌细胞SW480细胞信号转导及超微结构的影响.

方法: 设计两种siRNA片段并用其转染高表达paxillin的结直肠癌细胞SW480细胞系, 以空质粒作为阴性对照, 构建稳定转染细胞系. NC组为转染空质粒的细胞系, SW545组是稳定转染针对paxillin545-565靶基因位点的siRNA片段的细胞系, SW782组是稳定转染针对paxillin782-802靶基因位点的siRNA片段的细胞系. Western blot检测SW480、NC、SW545及SW782 4组细胞系中paxillin、FAK、ERK1/2及AKT1/2/3的表达及特异位点磷酸化水平. 利用培养细胞制备切片, 透射电镜下观察几组细胞系的超微结构.

结果: SW545细胞paxillin的高表达无明显改变, SW782细胞paxillin的高表达被显著下调, SW782细胞paxillin(Tyr118)磷酸化水平也显著降低. SW782细胞ERK1/2的表达水平无明显变化, 但是ERK1/2(Thr202/Tyr204)磷酸化水平显著降低. SW782细胞AKT1/2/3及FAK的表达及特异位点磷酸化水平均无明显变化.与SW480细胞相比, NC组细胞无明显超微结构改变, 但是SW782细胞却发生了显著的超微结构变化, 具有明显增多的微绒毛、微丝微管束与溶酶体以及明显减少的线粒体.

结论: 下调paxillin高表达能够逆转SW480细胞典型的恶性转化细胞的超微结构特征, paxillin高表达可能通过磷酸化激活paxillin及ERK1/2信号转导通路从而在结直肠癌发生发展中起着非常重要的作用.

Keywords: 桩蛋白; siRNA; SW480细胞系; 细胞信号转导; 超微结构