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健脾清热活血方介导Wnt/β-catenin通路对人结肠SW480细胞的影响
张保静, 张涛, 陈远能, 广西中医药大学附属瑞康医院消化内科 广西壮族自治区南宁市 530011
王小平, 江西中医药高等专科学校 江西省抚州市 344700
潘怀耿, 广州中医药大学 广东省广州市 510405
张保静, 在读硕士, 主要从事消化系疾病的研究.
基金项目: 国家自然基金资助项目, No. 81001507; No. 81260536; 广西卫生厅重点基金资助项目, No. 2011041.
作者贡献分布: 张保静与张涛对此文所做贡献均等; 张涛为课题总负责人; 本课题由张涛、陈远能、王小平及张保静设计; 文献检索、实验过程及数据分析由张保静与潘怀耿完成; 研究所用试剂与工具由张涛与陈远能提供; 论文撰写由张保静完成.
通讯作者: 张涛, 副教授, 530011, 广西壮族自治区南宁市华东路10号, 广西中医药大学附属瑞康医院消化内科. zhangxuan271@yahoo.com
收稿日期: 2013-01-04
修回日期: 2013-01-28
接受日期: 2013-02-18
在线出版日期: 2013-03-28
修回日期: 2013-01-28
接受日期: 2013-02-18
在线出版日期: 2013-03-28
Abstract
目的: 观察人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡及β-catenin、T细胞因子4(T cell factor 4, TCF-4)、C-myc、CyclinD1表达变化, 探讨健脾清热活血方防治结肠癌的可能机制.
方法: 将SW480细胞分为空白组、治疗组、对照组; 采用血清药理学方法, 空白组给予胎牛血清; 治疗组分别给予等比稀释不同浓度含药血清; 对照组给予美沙拉嗪含药血清干预体外培养的结肠癌细胞SW480(24 h), 应用MTT法检测细胞增殖, 流式细胞仪分析细胞凋亡率、细胞周期, 免疫荧光染色分析细胞β-catenin蛋白表达, Western blot及荧光定量PCR检测β-catenin、TCF-4、C-myc、CyclinD1蛋白及mRNA表达.
结果: 与空白组比较, 治疗组SW480细胞存活率明显下降(P<0.05), 稀释浓度为5%、10%、15%、20%、30%的不同剂量组细胞生长抑制率分别为28.00%、44.58%、65.86%、57.86%、49.89%, 但与药物浓度没有剂量依赖性(P>0.05); 与对照组比较, 治疗组S期细胞增多、G1期细胞减少, 且与药物浓度有剂量依赖性(P<0.05); 空白组β-catenin表达以核内表达为主, 治疗组β-catenin胞质/核异位表达下降(P<0.05), 以胞膜表达为主; 与空白组比较, 治疗组可明显下调β-catenin、TCF-4、C-myc、CyclinD1蛋白及mRNA表达并促进细胞凋亡(P<0.01), 以中剂量更为明显.
结论: 健脾清热活血方可能通过介导Wnt/β-catenin通路, 干预SW480细胞G1期, 诱导细胞凋亡, 发挥防治结肠癌的效应.
Keywords: 健脾清热活血中药; β-catenin; T细胞因子4; C-myc; CyclinD1; Wnt/β-catenin; 凋亡