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世界华人消化杂志. 2013-10-18; 21(29): 3053-3058
Published online 2013-10-18. doi: 10.11569/wcjd.v21.i29.3053
Published online 2013-10-18. doi: 10.11569/wcjd.v21.i29.3053
shRNA沉默MRE11表达对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU DNA损伤修复的影响
范芳, 耿磊, 李大玉, 李长福, 遵义医学院生化教研室 贵州省遵义市 563099
范芳, 副教授, 主要从事肿瘤分子生物学的研究.
基金项目: 贵州省科技基金资助项目, No. [2009]3066; 遵义市红花岗区科技基金资助项目, No. (2009)18.
作者贡献分布: 课题由范芳与耿磊设计; 研究过程由范芳、耿磊及李大玉完成; 研究试剂由李大玉提供; 数据分析由范芳、耿磊及李长福完成; 论文写作由范芳与耿磊完成.
通讯作者: 范芳, 副教授, 563099, 贵州省遵义市大连路201号, 遵义医学院生化教研室. fanf1970@126.com
电话: 0852-8609445
收稿日期: 2013-07-24
修回日期: 2013-08-09
接受日期: 2013-09-09
在线出版日期: 2013-10-18
修回日期: 2013-08-09
接受日期: 2013-09-09
在线出版日期: 2013-10-18
Abstract
目的: 观察shMRE11沉默MRE11基因对肝癌耐药细胞Bel7402/5-FU DNA损伤修复功能的影响.
方法: 采用阳离子脂质体法将shMRE11干扰质粒转染BEL7402/5-FU细胞, Real-time PCR及Western blot检测沉默效率; Western blot检测细胞γ-H2AX蛋白表达; EdU法检测细胞DNA合成; MTT法检测细胞增殖情况.
结果: Real-time PCR及Western blot检测结果显示MRE11 mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为78.0%、56.1%; Western blot检测γ-H2AX表达结果显示shMRE11实验组(1.04±0.056)较对照组(0.847±0.025)增加(P<0.05, t = 10.78); EdU检测结果显示shMRE11实验组DNA合成率(38.819±2.607)较对照组(49.814±1.227)降低(P<0.05, t = -8.87); MTT细胞增殖检测结果显示转染72 h后shMRE11实验组(0.58±0.08)与对照组(0.87±0.09)相比细胞增殖速度减慢(P<0.05, t = -50.2).
结论: shMRE11干扰质粒能够有效抑制BEL7402/5-FU细胞中MRE11表达, 使细胞DNA损伤修复能力减弱、抑制细胞增殖.
Keywords: 减数分裂重组蛋白11; RNA干扰; BEL7402/5-FU; DNA损伤修复
核心提示: 转染靶向MRE11的shRNA干扰质粒能增加化疗药物对耐药细胞造成的损伤, 使DNA损伤修复功能减弱, 增加药物对细胞的损伤程度; 对细胞的生物学行为产生影响, 使细胞增殖速度减慢, MRE11的沉默能够降低BEL7402/5-FU细胞的耐药性.