临床研究
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世界华人消化杂志. 2013-10-08; 21(28): 2937-2944
Published online 2013-10-08. doi: 10.11569/wcjd.v21.i28.2937
下调缺氧诱导因子-1α表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响
王理, 姚敏, 顾星, 时运, 邱历伟, 陆少林, 姚登福
王理, 姚敏, 顾星, 时运, 邱历伟, 陆少林, 姚登福, 南通大学附属医院临床医学研究中心 江苏省南通市 226001
王理, 博士后, 副教授, 主要从事临床医学及信息管理的研究.
基金项目: 中国博士后科学基金资助项目, No. 2012M521108; 国家国际科技合作专项基金资助项目, No. 2013DFA32150.
作者贡献分布: 方法研究、数据整理及文章起草由王理完成; 临床资料与病例选择由姚敏完成; 顾星与时运参加完成部分研究工作; 统计分析由邱历伟完成; 设计、论文修改及审阅由姚登福与陆少林完成
通讯作者: 姚登福, 教授, 226001, 江苏省南通市西寺路20号, 南通大学附属医院临床医学研究中心. yaodf@ahnmc.com
电话: 0513-85052413 传真: 0513-85052297
收稿日期: 2013-04-23
修回日期: 2013-05-28
接受日期: 2013-09-09
在线出版日期: 2013-10-08
Abstract

目的: 观察肝癌缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1alpha, HIF-1α)表达及靶向其基因转录对肝癌细胞增殖的影响.

方法: 以自身配对法收集术后肝癌及癌周组织, 免疫组织化学染色法分析HIF-1α胞内表达及分布; 按照HIF-1α基因序列合成miRNA, 筛选干扰效率最佳者转染肝癌(HepG2)细胞, 以荧光定量-PCR和Western blot分别检测HIF-1α转录和蛋白表达; 并以miRNA转染联合阿霉素后, 流式细胞仪检测沉默细胞中HIF-1α对HepG2细胞增殖的影响.

结果: 肝癌及癌周组织HIF-1α表达呈棕黄色颗粒状, 位于胞浆和部分胞核, 呈均匀表达, 中央静脉周围明显; 其阳性率癌组织为80%, 低于癌旁100%表达(χ2 = 22.35, P<0.001); 与瘤体大小和分化程度相关; HepG2细胞经miRNA干扰后, HIF-1α在RNA和蛋白水平分别下降87%和56%, 发生细胞凋亡(22.46%±0.61%)和G1期阻滞(61.49%±1.12%, P<0.01); 加入阿霉素后细胞凋亡率和G1期细胞分别增至36.99%±0.88%和65.68%± 0.91%.

结论: HIF-1α过表达与肝癌密切相关, 以特异性miRNA靶向HIF-1α, 可调控细胞周期, 通过加速凋亡的机制抑制癌细胞增殖.

Keywords: 肝癌; 缺氧诱导因子-1α; miRNA; 基因沉默; 增殖抑制

核心提示: 肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma)血供丰富, 传统疗法易耐受, 预后极差. 肝癌细胞增殖失控导致局部缺氧, 激活缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α), 进而增强血管新生、促进癌细胞增殖及转移, 抑制细胞凋亡和分化. 本研究分析了肝癌及癌周组织HIF-1α表达, 并以miRNA或联合阿霉素在体外干扰细胞中HIF-1α表达, 观察肝癌细胞凋亡和增殖周期的变化, 发现肝癌组织内HIF-1α表达水平异常升高, 其表达增强与癌周围组织的增生活跃密切相关. 沉默HIF-1α可逆转缺氧引起的HIF-1α升高, 控制癌细胞增殖, 可作为一种辅助策略应用于肝癌的治疗.