基础研究
Copyright ©The Author(s) 2013. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2013-09-28; 21(27): 2772-2779
Published online 2013-09-28. doi: 10.11569/wcjd.v21.i27.2772
小干扰RNA靶向抑制DcR3基因对肝癌细胞凋亡和迁移的影响
苏传丽, 罗殿中, 陈罡, 覃新干
苏传丽, 罗殿中, 陈罡, 广西医科大学病理学教研室 广西医科大学第一附属医院病理科 广西壮族自治区南宁市 530021
覃新干, 广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科 广西壮族自治区南宁市 530021
苏传丽, 主治医师, 主要从事肿瘤的分子生物学研究.
基金项目: 广西研究生教育创新计划基金资助项目, No. 2007105981001M02.
作者贡献分布: 此课题由苏传丽与罗殿中设计; 研究过程由苏传丽与覃新干操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由苏传丽、陈罡及罗殿中提供; 数据分析由苏传丽与覃新干完成; 本论文写作由苏传丽与罗殿中完成.
通讯作者: 罗殿中, 教授, 530021, 广西壮族自治区南宁市双拥路6号, 广西医科大学第一附属医院病理科. luodianzhong@yahoo.com.cn
电话: 0771-5748712
收稿日期: 2013-07-09
修回日期: 2013-08-12
接受日期: 2013-08-23
在线出版日期: 2013-09-28
Abstract

目的: 应用RNA干扰技术抑制人肝细胞癌细胞系HepG2细胞DcR3表达, 并研究DcR3基因沉默后对HepG2细胞凋亡和迁移能力的影响.

方法: 设计并合成特异性DcR3-siRNA 4条和阴性对照siRNA 1条, 转染HepG2细胞, 通过半定量反转录-PCR(RT-PCR)及免疫细胞化学方法检测其对DcR3表达的抑制作用并筛选出干扰效果最强的siRNA, 应用流式细胞仪、DNA ladder方法检测细胞的凋亡情况, 应用划痕实验检测细胞体外迁移能力的变化.

结果: 各特异性DcR3-siRNA均能抑制DcR3 mRNA表达(P<0.05), 其中以DcR3-siRNA4的抑制作用最明显, 抑制作用达62.9%; 将DcR3-siRNA4转染HepG2细胞能明显抑制HepG2细胞DcR3蛋白的表达(P<0.01). 流式细胞仪检测结果显示, 特异性DcR3-siRNA转染组细胞的凋亡率(22.97%±2.10%)明显高于空白对照组(1.17%±0.32%)、脂质体转染组(1.44%±0.43%)和非特异性siRNA转染组(1.22%±0.40%)(均P<0.001); DNA ladder实验发现特异性DcR3-siRNA转染组出现DNA ladder, 而空白对照组、脂质体转染组和非特异性siRNA转染组均未出现DNA ladder. 划痕实验结果显示, 转染后24、48和72 h, 特异性DcR3-siRNA转染组细胞的相对迁移率均低于空白对照组、脂质体转染组和非特异性siRNA转染组.

结论: DcR3在肝癌细胞的凋亡及迁移中发挥重要作用, 抑制DcR3的表达能诱导肝癌细胞凋亡并降低肝癌细胞的迁移能力.

Keywords: DcR3; 肝细胞癌; RNAi; 凋亡; 迁移

核心提示: 诱捕受体3(decoy receptor 3, DcR3)在肝癌细胞中过表达, 并在肝癌细胞的凋亡及迁移中发挥重要作用, 抑制DcR3的表达能诱导肝癌细胞凋亡并降低肝癌细胞的迁移能力.