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世界华人消化杂志. 2013-08-08; 21(22): 2128-2135
Published online 2013-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v21.i22.2128
Published online 2013-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v21.i22.2128
PLK1基因RNAi慢病毒载体的构建及对食管鳞癌细胞侵袭转移的影响
于文静, 陈丽梅, 冯卫国, 杜长青, 刘顺梅, 赵春玲, 潍坊医学院细胞生物学教研室 山东省潍坊市 261053
张宝刚, 潍坊医学院病理学教研室 山东省潍坊市 261053
王守训, 潍坊医学院生物化学教研室 山东省潍坊市 261053
于文静, 讲师, 主要从事肿瘤分子生物学的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, Nos. 30901779, 81072608; 山东省自然科学基金资助项目, No. ZR2010HM065; 山东省高等学校科技计划基金资助项目, No. J10LC20.
作者贡献分布: 此课题由赵春玲与刘顺梅设计; 研究过程由于文静、陈丽梅及杜长青操作完成; 研究所用部分试剂与分析工具由张宝刚与王守训提供; 数据分析由于文静与冯卫国完成; 本论文写作由于文静与赵春玲完成.
通讯作者: 赵春玲, 副教授, 硕士生导师, 261053, 山东省潍坊市宝通西街7166号, 潍坊医学院细胞生物学教研室. zhaochunlingbj@163.com
电话: 0536-8462053
收稿日期: 2013-05-27
修回日期: 2013-06-13
接受日期: 2013-07-03
在线出版日期: 2013-08-08
修回日期: 2013-06-13
接受日期: 2013-07-03
在线出版日期: 2013-08-08
Abstract
目的: 研究慢病毒介导的PLK1(Polo-like kinase 1)基因RNAi对食管鳞癌细胞侵袭转移的影响.
方法: 利用RT-PCR和Western blot检测不同食管鳞癌细胞中PLK1的表达. 根据人PLK1 mRNA序列设计干扰片段, Western blot检测干扰效率; 利用划痕愈合实验及Transwell实验研究靶向PLK1的RNAi对食管鳞癌细胞体外侵袭转移能力的影响. 将有效干扰序列构建至慢病毒干扰载体pGLV/H1/GFP+Puro中, 测序鉴定. 重组慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞包装病毒, 制备的重组病毒感染食管鳞癌细胞, 利用荧光定量PCR和Western blot检测干扰效率; 利用裸鼠肺转移模型实验研究慢病毒介导的PLK1基因RNAi对食管鳞癌细胞在体内侵袭转移能力的影响.
结果: 筛选出一种高表达PLK1的食管鳞癌细胞株TE-8用于实验研究; 筛选出有效的干扰片段, 并成功构建靶向干扰PLK1基因的慢病毒载体, 制备重组病毒颗粒用于感染食管鳞癌细胞; 靶向PLK1的RNAi在体内外均能明显抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移.
结论: 靶向干扰PLK1基因的重组慢病毒能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移, PLK1基因影响着食管鳞癌的恶性进展.
Keywords: PLK1; 侵袭; 转移; 慢病毒载体; RNAi; 食管鳞癌
核心提示: PLK1(Polo-like kinase 1)在鳞状食管癌组织中呈高表达, 且表达程度与食管鳞癌的分化程度及淋巴结转移密切相关, 筛选有效的干扰片段, 成功构建靶向干扰PLK1基因的慢病毒载体, 靶向PLK1的RNAi在体内外均能明显抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移, PLK1基因影响着食管鳞癌的恶性进展.