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世界华人消化杂志. 2013-07-18; 21(20): 1966-1971
Published online 2013-07-18. doi: 10.11569/wcjd.v21.i20.1966
Published online 2013-07-18. doi: 10.11569/wcjd.v21.i20.1966
pAcGFP1-N1-FOXQ1真核表达载体的构建及在大肠癌细胞系Colo-320中的表达
岳柯琳, 郭强, 昆明医科大学, 云南省第一人民医院(昆明理工大学附属医院)消化内科 云南省昆明市 650032
唐慧, 云南省第一人民医院(昆明理工大学附属医院)临床基础医学研究所 云南省昆明市 650032
岳柯琳, 在读硕士, 主要从事消化系肿瘤的基础研究和消化内镜的临床应用.
作者贡献分布: 此课题由郭强与唐慧设计; 研究过程由岳柯琳操作完成; 唐慧负责实验指导; 郭强与唐慧负责论文指导与修改; 论文写作由岳柯琳完成.
通讯作者: 郭强, 主任医师, 650032, 云南省昆明市金碧路157号, 云南省第一人民医院消化内科. gqkj003@sina.com
电话: 0871-3638772 传真: 0871-3648772
收稿日期: 2013-04-23
修回日期: 2013-06-02
接受日期: 2013-06-05
在线出版日期: 2013-07-18
修回日期: 2013-06-02
接受日期: 2013-06-05
在线出版日期: 2013-07-18
Abstract
目的: 构建人FOXQ1(homo sapiens forkhead box Q1)基因真核表达载体pAcGFP1-N1-FOXQ1, 并在大肠癌细胞系Colo-320中瞬时表达.
方法: 利用PCR方法从YR Gene装载了FOXQ1基因全长cDNA序列(NM_033260)的质粒中扩增出FOXQ1的cDNA片段, 与真核表达载体pAcGFP1-N1连接, 重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定无误后, 采用Lipofectamine 2000瞬时转染Colo-320细胞, 应用荧光显微镜观察转染效率、Western blot检测FOXQ1蛋白表达水平.
结果: 成功构建了真核表达载体pAcGFP1-N1-FOXQ1, PCR、双酶切和测序鉴定结果均正确, 载体能在Colo-320细胞中正确表达FOXQ1蛋白.
结论: 成功构建FOXQ1真核表达载体, 为进一步开展体内、体外实验, 研究FOXQ1基因在肿瘤发生发展中的功能奠定了实验基础.
Keywords: FOXQ1基因; pAcGFP1-N1质粒; 构建
核心提示: 研究FOXQ1(homo sapiens forkhead box Q1)基因在大肠癌肿瘤生成中的功能及其分子机制, 有望发现FOXQ1基因参与的与大肠癌发生发展密切相关的信号通路及其下游靶分子, 为寻找新的大肠癌治疗靶点奠定基础.