基础研究
Copyright ©The Author(s) 2013. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2013-06-28; 21(18): 1685-1692
Published online 2013-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v21.i18.1685
miR-130b在食管鳞癌中的表达及对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响
郁婷婷, 李硕, 傅敏根, 曹日昇, 朱宏, 施瑞华
郁婷婷, 李硕, 傅敏根, 曹日昇, 朱宏, 施瑞华, 南京医科大学第一附属医院消化内科 江苏省南京市 210029
郁婷婷, 在读硕士, 主要从事消化系统疾病的研究.
基金项目: 江苏省人民医院食管疾病创新团队基金资助项目, No. CX11.
作者贡献分布: 此课题由施瑞华与郁婷婷设计; 研究过程主要由郁婷婷操作完成; 李硕与傅敏根参与操作; 曹日昇与朱宏参与实验指导; 本论文数据分析及写作由郁婷婷完成.
通讯作者: 施瑞华, 教授, 主任医师, 210029, 江苏省南京市广州路300号，江苏省南京医科大学第一附属医院消化内科. ruihuashi@126.com
收稿日期: 2013-03-21
修回日期: 2013-05-12
接受日期: 2013-05-19
在线出版日期: 2013-06-28
Abstract

目的: 检测微小RNA-130b(miR-130b)在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)组织中的表达并探讨其对ESCC细胞增殖、迁移的影响.

方法: microRNA(miRNA)芯片筛选ESCC组织中异常表达的miRNAs, TaqMan MGB探针法定量PCR检测19例ESCC组织及配对癌旁组织标本中miR-130b的表达; 通过脂质体转染模拟物miR-130b mimics(miR-130bm)促进ESCC细胞Eca109中miR-130b的表达, 转染抑制物miR-130b inhibitor(miR-130bi)抑制Eca109细胞中miR-130b的表达; 进一步采用CCK-8法和Transwell迁移实验检测ESCC细胞增殖、迁移的变化; 生物学信息预测miR-130b的靶基因, 双荧光素酶报告基因验证其靶向作用; 采用SYBR Green定量PCR和Western blot检测靶基因mRNA和蛋白表达.

结果: miR-130b在ESCC组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01); 转染miR-130bm可有效增加ESCC细胞Eca109中miR-130b的表达, 进而促进Eca109细胞的增殖和迁移, 平均迁移细胞数明显多于对照(112.9±2.4 vs 54.3±1.8, P<0.01); 转染miR-130bi则降低细胞中miR-130b的表达; 进而抑制细胞的增殖和迁移, 平均迁移细胞数较对照明显减少(33.9±2.3 vs 56.2±1.9, P<0.01). miR-130b可作用于PTEN3'非翻译区抑制其表达. miR-130b可负向调控PTEN蛋白表达, 并促进Akt磷酸化, 但对PTEN mRNA表达无明显影响.

结论: miR-130b在ESCC组织中表达上调, 增加其表达促进ESCC细胞Eca109增殖和迁移, 降低其表达则抑制Eca109细胞增殖和迁移; miR-130b可在转录后水平负向调控PTEN的表达并促进Akt磷酸化. 提示miR-130b有望成为ESCC治疗的新靶点.

Keywords: 食管鳞癌; miR-130b; 增殖; 迁移

核心提示: 本研究初步证实了miR-130b在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)组织中表达上调, 具有促进ESCC细胞Eca109增殖和迁移的作用, 且可在转录后水平靶向调控PTEN蛋白的表达并促进Akt磷酸化. 本实验为ESCC发病机制的研究提供了新靶点, 为miR-130b用于ESCC的靶向治疗提供了初步的理论依据.