Smo siRNA对裸鼠食管癌移植瘤细胞凋亡的影响

Abstract

目的: 探讨小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)对人食管癌裸鼠移植瘤细胞凋亡影响.

方法: 使用Smo siRNA转染人食管癌EC9706细胞, 设无关序列组和空白对照组为对照, 将转染好的细胞注射到裸鼠肩胛旁区, 4 wk后取瘤组织. 采用免疫组织化学SP法、Western blot方法检测裸鼠移植瘤组织中Smo、Gli1蛋白的表达; 应用原位杂交、半定量RT-PCR方法检测裸鼠移植瘤组织中Smo、Gli1 mRNA的表达; 运用TUNEL法和透射电镜等方法观察裸鼠移植瘤细胞的凋亡情况.

结果: 转染siRNA后, 免疫组织化学和原位杂交结果显示, 3组组织中siRNA干扰组Smo蛋白(8.37±1.73)及mRNA(2.32±0.63)、Gli1蛋白(3.53±0.37)及mRNA(3.35±0.87)阳性表达细胞数均低于对照组(无关对照组Smo蛋白及mRNA分别为8.42±1.49、9.61±0.85, 空白对照组Smo蛋白及mRNA 8.37±1.73、9.82±0.63; 无关对照组Gli1蛋白及mRNA分别为0.89±0.06、8.41±1.64, 空白对照组Gli1蛋白及mRNA 0.91±0.05、8.53±1.38), 且差异均具有统计学意义(P<0.05); Western blot及RT-PCR结果显示, 与对照组相比(无关对照组Smo蛋白及mRNA分别为9.61±0.85、0.89±0.06; 空白对照组Smo蛋白及mRNA为0.91±0.05、0.96±0.07; 无关对照组Gli1蛋白及mRNA分别为0.87±0.08、0.89±0.07, 空白对照组Gli1蛋白及mRNA分别为0.84±0.06、0.87±0.06; siRNA干扰组中的Smo(0.33±0.06)及mRNA(0.35±0.07)、Gli1(0.29±0.05)及mRNA(0.29±0.05)的表达量明显下调, 组间两两相比差异具有统计学意义(P<0.05); TUNEL结果显示, siRNA干扰组凋亡率(apoptosis rate, AI)明显升高, 组间两两比较AI差异具有统计学意义(P<0.05); 透射电镜检测结果显示, 实验组与对照组相比凋亡细胞数明显增多. 细胞胞质固缩、电子致密度增高, 可见凋亡早期细胞, 染色质固缩并凝结成形态不同的块状, 凋亡晚期细胞可见, 细胞核裂解为碎块状, 产生凋亡小体. 两对照组超微结构无明显差异, 细胞膜完整, 线粒体等细胞器正常, 细胞核基本正常.

结论: Smo siRNA可通过下调裸鼠食管癌细胞中Smo基因的表达, 进而体内诱导裸鼠食管癌移植瘤细胞的凋亡.

Keywords: Sonic Hedgehog; Smoothened; 核转录因子; 裸鼠移植

核心提示: Hedgehog(HH)信号通路与食管癌密切相关, 设计合成的Smo siRNA可以沉默Smo基因, 抑制HH信号通路, 促进食管癌细胞的凋亡, 为分子靶向阻断HH信号通路治疗食管癌奠定了基础.