研究快报
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世界华人消化杂志. 2013-05-18; 21(14): 1303-1308
Published online 2013-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v21.i14.1303
RKIP过表达对肝星状细胞在细胞外基质上黏附的抑制
马俊骥, 赵慧, 姜慧卿
马俊骥, 赵慧, 姜慧卿, 河北医科大学第二医院消化内科, 河北省消化病实验室, 河北省消化病研究所 河北省石家庄市 050000
马俊骥, 主治医师, 主要从事慢性肝病和消化系肿瘤的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, Nos. 81200311, 81170411; 河北省自然科学基金资助项目, No. C2010000530.
作者贡献分布: 此课题由马俊骥与姜慧卿共同设计; 研究过程由马俊骥与赵慧共同操作完成; 数据分析由马俊骥与赵慧完成; 本论文写作由马俊骥、赵慧及姜慧卿共同完成.
通讯作者: 姜慧卿, 教授, 主任医师, 050000, 河北省石家庄市新华区和平西路215号, 河北医科大学第二医院消化内科. huiqingjiang@yahoo.com.cn
电话: 0311-66002955
收稿日期: 2013-03-10
修回日期: 2013-03-31
接受日期: 2013-04-12
在线出版日期: 2013-05-18
Abstract

目的: 通过Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein, RKIP)过表达腺病毒感染肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC), 模拟肝纤维化病理状态下细胞外基质(extracellular matrix, ECM)成分的改变, 探讨RKIP对HSC黏附功能的影响.

方法: 实验共分两组, 分别是RKIP过表达组(RKIP-AD)和阴性对照组(GFP-AD). 首先确定细胞感染病毒的最适感染强度(multiplicity of infection, MOI)值, 在倒置荧光显微镜下观察细胞状态, 计数细胞荧光数, 筛选出最适MOI值. Western blot方法确定病毒感染后验证外源RKIP在细胞内表达情况. 已干预好的细胞稀释成1.0×105/mL的浓度种在盖玻片和已准备好的由matrigel、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白包被的24孔板中, 37 ℃培养1 h后, 甲醛固定, 结晶紫染色. 200×纤维镜下观察并计数黏附的细胞数, 资料数据以mean±SD表示, 采用t检验进行统计分析.

结果: 人源HSC细胞株LX-2的腺病毒载体感染率可达到80%-90%, 适宜的MOI值为5. RKIP过表达组较对照组蛋白表达增多(3.47±0.02 vs 1.74±0.13, P<0.05). 与GFP-AD对照组相比, RKIP在HSC的过表达抑制细胞在matrigel上的黏附(80±14 vs 152±42, P<0.05). 与GFP-AD对照组相比, RKIP在HSC的过表达抑制细胞在Ⅰ型胶原上的黏附(70±13 vs 138±36, P<0.05). 与GFP-AD对照组相比, RKIP在HSC的过表达抑制细胞在纤维连接蛋白上的黏附(133±27 vs 276±106, P<0.05).

结论: 体外过表达RKIP可以抑制HSC在胶原基质上的黏附.

Keywords: 肝纤维化; 肝星状细胞; Raf激酶抑制蛋白; 细胞外基质; 黏附

核心提示: 慢性损伤伴随着肝细胞再生及基质重塑, Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein, RKIP)可以明显减少肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC)在细胞外基质matrigel、Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白上黏附的细胞数. RKIP过表达后HSC在与细胞外基质黏附能力下降伴其迁移能力增加, 因此慢性肝损伤的部位可以有大量HSC聚集.