研究快报
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世界华人消化杂志. 2013-05-08; 21(13): 1205-1210
Published online 2013-05-08. doi: 10.11569/wcjd.v21.i13.1205
活化大鼠肝星状细胞新表达甘丙肽2型受体拮抗甘丙肽增殖抑制作用
丁永年, 李郑红, 徐雷鸣, 熊静平, 陈源文, 范建高
丁永年, 熊静平, 新疆医科大学第二附属医院消化内科 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830028
李郑红, 徐雷鸣, 陈源文, 范建高, 上海交通大学医学院附属新华医院消化内科 上海市 200092
丁永年, 副教授, 主任医师, 主要从事慢性肝病防治方面的研究.
基金项目: 新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目, No. 211233146-10.
作者贡献分布: 丁永年与李郑红对此文所作贡献均等; 课题由徐雷鸣与陈源文设计; 研究过程由李郑红与熊静平完成; 研究所用试剂与分析工具由陈源文与范建高提供; 数据分析由丁永年与陈源文完成; 本论文写作由丁永年、李郑红及陈源文完成.
通讯作者: 陈源文, 副主任医师, 200092, 上海市控江路1665号, 上海交通大学医学院附属新华医院消化内科. shsmus@263.net
收稿日期: 2013-01-15
修回日期: 2013-04-01
接受日期: 2013-04-12
在线出版日期: 2013-05-08
Abstract

目的: 探讨甘丙肽受体在肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)中表达和对细胞增殖的影响.

方法: 使用胶原酶原位灌注法分离大鼠原代HSC体外培养, 半定量RT-PCR法检测静止期(0 wk)和培养活化(1 wk)HSC中甘丙肽及其3种受体(GalR1、GalR2和GalR3)表达变化. 大鼠HSC-T6细胞株体外培养, 免疫荧光法检测GalR2蛋白在HSC-T6细胞中表达; 给或不给GalR2中和抗体(5 μg/mL), MTT法观察不同浓度甘丙肽(0-10000 nmol/L)干预后甘丙肽对HSC增殖和活力的影响.

结果: 成功分离大鼠原代HSC和体外培养. 静止期及活化的HSC均可检测到甘丙肽及GalR3 mRNA表达, 但无GalR1 mRNA表达, 而GalR2 mRNA在活化HSC中表达. 细胞免疫荧光法进一步证实GalR2蛋白在HSC-T6中表达. 甘丙肽处理时, HSC-T6增殖水平在1、10、100和1000 nmol/L甘丙肽时分别下降至对照组的86.7%(t = 3.976, P = 0.028)、83.1%(t = 4.45, P = 0.012)、78.1% (t = 5.75, P = 0.006)和73.1%(t = 5.38, P = 0.008); 给予GalR2中和抗体联合干预时, HSC-T6增殖抑制在甘丙肽1和10 nmol/L时即降至相应对照组67.9%(t = 5.11, P = 0.015)和73.1%(t = 6.56, P = 0.003), 与相应浓度甘丙肽组相比, 分别下降21.7%(t = 3.35, P = 0.028)和12.6%(t = 2.78, P = 0.049).

结论: HSC活化时新表达GalR2拮抗GalR1介导的甘丙肽对HSC增殖抑制作用.

Keywords: 甘丙肽; 肝星状细胞; 受体; 增殖

核心提示: 通过研究甘丙肽及其3种受体在不同活化状态下在肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)中的表达情况以及比较不同受体对HSC增殖活性的影响, 为甘丙肽在HSC生物学功能调控中的作用提供了实验基础, 且为甘丙肽在肝纤维化中的重要作用研究提供实验依据.