基础研究
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世界华人消化杂志. 2013-04-28; 21(12): 1062-1069
Published online 2013-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v21.i12.1062
沉默干扰HMGA2对胃癌细胞Wnt/β-Catenin信号转导通路的影响
姜丹, 赖铭裕, 陈家庄, 韦丽秀
姜丹, 赖铭裕, 陈家庄, 韦丽秀, 广西医科大学第一附属医院老年消化内科 广西壮族自治区南宁市 530021
姜丹, 在读硕士, 主要从事胃癌发病机制方面的研究.
基金项目: 广西医疗卫生重点科研基金资助项目, No. 重2010021; 广西自然科学基金资助项目, No. 2010GXNSFA013166.
作者贡献分布: 姜丹与赖铭裕对此文所作贡献均等; 本论文写作、数据分析由姜丹与赖铭裕完成; 实验设计、资金申请及论文审阅指导由赖铭裕完成; 实验操作由姜丹、陈家庄及韦丽秀完成.
通讯作者: 赖铭裕, 教授, 530021, 广西壮族自治区南宁市双拥路6号, 广西医科大学第一附属医院老年消化内科. laimingyu2005103@yahoo.com.cn
电话: 0771-2665673
收稿日期: 2013-01-31
修回日期: 2013-03-06
接受日期: 2013-04-07
在线出版日期: 2013-04-28
Abstract

目的: 观察小分子RNA沉默HMGA2在胃癌细胞株MKN-45的表达, 研究HMGA2对Wnt/β-Catenin通路中主要分子β-Catenin以及下游靶分子c-myc、Cyclin D1的表达量及转录活性的影响, 探讨HMGA2对Wnt/β-Catenin信号转导通路的影响.

方法: 构建针对人HMGA2基因的shRNA真核表达载体, 瞬时转染人胃癌细胞株MKN-45, 用RT-PCR、Western blot分别检测转染后shHMGA2组、scrambled组和空白对照组细胞中HMGA2 mRNA和蛋白的表达情况, 评估抑制效应; 分别检测转染后3组细胞中的β-Catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达水平.

结果: 转染48 h后shHMGA2-1组的HMGA2 mRNA相对表达量(0.58±0.07), 与shHMGA2-2组(0.92±0.13)、shHMGA2-3组(0.90±0.16)、scrambled组(1.07±0.14)及空白对照组(1.19±0.09)相比有统计学意义(P<0.05), 其他4组相比无统计学意义(P>0.05); 转染48 h后shHMGA2-1组的HMGA2沉默效果最好, HMGA2 mRNA表达明显下降,抑制率51.3%; 故选用质粒shHMGA2-1继续后续实验; Western blot结果显示转染72 h后shHMGA2-1组HMGA2蛋白相对表达量为(0.11±0.03), 与scrambled组(0.48±0.12)及空白对照组(0.55±0.08)相比有统计学意义(P<0.05), HMGA2蛋白表达明显下降, 抑制率80%; 沉默干扰HMGA2 48 h和72 h后, β-Catenin mRNA和蛋白表达水平在空白对照组(1.07±0.02, 0.69±0.04)与scrambled组(0.91±0.02, 0.67±0.10)中无明显差异(P>0.05), 而shHMGA2-1组(0.53±0.04, 0.44±0.05)较之两组有明显的下降(P<0.05); shHMGA2-1组中c-myc mRNA和蛋白相对表达量为(0.39±0.04, 0.25±0.07)较之空白对照组(0.88±0.05, 0.75±0.09)、scrambled组(0.84±0.03, 0.66±0.10)有明显下降(P<0.05), 后两组相比较无统计学意义(P>0.05); shHMGA2-1组中Cyclin D1 mRNA和蛋白相对表达量为(0.31±0.02, 0.12±0.01)较之空白对照组(0.52±0.03, 0.73±0.12)、scrambled组(0.51±0.01, 0.63±0.07)有明显下降(P<0.05), 后两组相比较无统计学意义(P>0.05).

结论: RNAi载体能有效地抑制HMGA2在胃癌细胞株MKN-45中的表达, 沉默干扰HMGA2抑制了Wnt/β-Catenin通路中的主要分子β-Catenin以及下游靶分子c-myc、Cyclin D1的表达, HMGA2基因可能是通过调控Wnt/β-Catenin通路对胃癌细胞生长和凋亡发挥作用的.

Keywords: 高迁移率蛋白A2; 胃癌细胞; 短发夹RNA; Wnt/β-Catenin信号通路

核心提示: HMGA2在胃癌组织中高表达, 而在正常胃组织中几乎不表达. 沉默干扰HMGA2基因后, β-Catenin mRNA和蛋白的表达水平受到抑制, 使得β-Catenin在胞质中降解, Wnt/β-Catenin信号转导通路下游的靶分子c-myc、Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达水平也受到抑制, 从而抑制细胞的生长增殖和促进细胞的凋亡. HMGA家族可能通过Wnt/β-Catenin信号转导通路最终导致胃癌的发生.