基础研究
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世界华人消化杂志. 2012-12-18; 20(35): 3431-3438
Published online 2012-12-18. doi: 10.11569/wcjd.v20.i35.3431
靶向SMAD3基因的shRNA重组慢病毒对大鼠肝再生的作用
张莹, 孔贺利, 郑素军, 刘梅, 陈煜, 刘霜, 段钟平
张莹, 中国人民解放军第302医院 北京市 100039
孔贺利, 郑素军, 刘梅, 陈煜, 刘霜, 段钟平, 首都医科大学附属北京佑安医院 北京市 100069
张莹, 硕士, 主要从事重型肝炎肝衰竭防治方面的研究.
基金项目: 国家125科技重大专项"艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治" 基金资助项目, No. 2012ZX10002004-006; No. 2012ZX10004904-003-001; 国家自然科学基金资助项目, No. 30800979; 北京自然科学基金资助项目, No. 7102085; 北京市科技新星基金资助项目, No. 2007B055; 北京市卫生系统高层次卫生技术人才基金资助项目, No. 2011-3-083.
作者贡献分布: 张莹与孔贺利对此文所作贡献均等, 为共同第一作者; 此课题由郑素军与段钟平设计并给予实验指导; 研究过程由张莹、孔贺利及刘梅操作完成; 数据分析由张莹完成; 陈煜与刘霜给予实验指导; 论文写作由张莹完成; 郑素军审校.
通讯作者: 郑素军, 副教授, 100069, 北京市丰台区右安门外西头条8号, 首都医科大学附属北京佑安医院. zhengsujun003@126.com
电话: 010-63291007
收稿日期: 2012-10-22
修回日期: 2012-11-15
接受日期: 2012-12-03
在线出版日期: 2012-12-18
Abstract

目的: 应用大鼠肝大部切除肝再生模型, 将前期构建好的靶向SMAD3基因的shRNA重组慢病毒注射入大鼠体内, 观察SMAD3 shRNA对大鼠肝再生的影响.

方法: 将60只♂Wistar大鼠随机分为3组: SMAD3 shRNA组(20只)、shRNA对照组(20只)、生理盐水对照组(20只), 通过脾脏注射方法给药, 慢病毒给药剂量为1.0×108 TU/只, 生理盐水对照组给予等体积500 μL生理盐水. 给药96 h后行2/3肝大部切除, 构建大鼠肝再生模型; 肝大部切除术后96 h各组分别除死大鼠7只, 剩余大鼠于144 h处死, 收集肝脏标本, Real-Time PCR、免疫组织化学检测肝组织SMAD3表达, 免疫组织化学检测肝组织Ki67表达, 测定大鼠肝质量/体质量, 观察SMAD3 shRNA对肝再生的影响.

结果: Real-Time PCR检测显示, 通过脾脏注射慢病毒, 在96、144 h处死时间点, SMAD3 shRNA组SMAD3 mRNA分别较shRNA对照组平均下降73%、63%. 免疫组织化学检测显示SMAD3蛋白表达明显下降. Ki67免疫组织化学结果显示, 肝大部切除术后96、144 h, SMAD3 shRNA组Ki67表达阳性细胞数均明显多于生理盐水对照组及shRNA对照组, 表明抑制SMAD3表达后肝细胞增殖活跃. 大鼠肝质量与体质量比值显示, SMAD3 shRNA组分别较生理盐水对照组及shRNA对照组有增加趋势(96 h: 4.50±0.43 vs 3.97±0.55 vs 3.98±0.40, 144 h: 4.66±0.54 vs 4.15±0.51 vs 4.20±0.34), 但没有统计学意义(P>0.05).

结论: SMAD3 shRNA在大鼠体内可一定程度上促进肝细胞增殖, 但对肝再生的促进作用尚弱.

Keywords: SMAD3; shRNA; 慢病毒; 肝再生