Published online 2012-12-18. doi: 10.11569/wcjd.v20.i35.3424
修回日期: 2012-11-15
接受日期: 2012-12-03
在线出版日期: 2012-12-18
目的: 研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony- stimulating factor, GM-CSF)编码基因对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)核心(core, C)蛋白编码基因重组质粒诱导的免疫应答有无增强作用.
方法: 人工合成HCV核心蛋白基因至克隆载体pUC119上, 酶切后与真核表达质粒pCMH6K连接, 测序正确后将重组质粒pCMH6K/HCV-C转染中华仓鼠卵巢(China hamster ovary, CHO)细胞. 免疫荧光检测转染的CHO细胞中HCV C蛋白分布与表达. 将已构建成功的GM-CSF编码基因重组子(pGM-CSF)联合pCMH6K/HCV-C肌注免疫Balb/c鼠, ELISA法检测免疫小鼠血清抗HCV C特异性抗体水平, 经流式细胞仪检测不同免疫原免疫鼠后脾T淋巴细胞亚群及Th细胞内细胞因子[干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)、白介素-4(interleukin-4, IL-4)]变化, LDH法测定CTL活性.
结果: pCMH6K/HCV-C经鉴定构建正确. 所编码的蛋白主要分布于胞膜, 少量分布于胞浆. pGM-CSF+pCMH6K/HCV-C联合免疫组和pCMH6K/HCV-C单独免疫组均产生抗HCV C特异性抗体, 两组间比较差异无统计学意义; 联合免疫组CD4+T淋巴细胞比例为44.90%±5.99%, 明显高于其他组(P<0.05). 不同免疫组CD8+T细胞比例变化不大, 与空载体pcDNA3.1(+)组比较, 差异无统计学意义(P>0.05). 联合免疫组CTL活性为56.48%±4.68%, 明显高于其他组(P<0.05). 联合免疫组IFN-γ/IL-4比值为18.20±2.36, 明显高于其他组(P<0.05).
结论: GM-CSF编码基因可增强HCV C基因DNA疫苗的细胞免疫应答, 并能够诱导Th1型免疫应答.