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世界华人消化杂志. 2012-11-28; 20(33): 3244-3247
Published online 2012-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v20.i33.3244
Published online 2012-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v20.i33.3244
离体消化法分离原代肝星状细胞
樊文梅, 肖漓, 马锡慧, 石炳毅, 中国人民解放军第三零九医院器官移植研究所 北京市 100091
刘德忠, 中国人民解放军第二炮兵总医院泌尿外科 北京市 100091
樊文梅, 博士, 主要从事肝纤维化方面的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30800509; 北京市科技专项2011阶梯计划基金资助项目, No. Z111102055311086.
作者贡献分布: 本课题由樊文梅与石炳毅设计; 研究过程由樊文梅、刘德忠、肖漓及马锡慧完成; 本论文写作由樊文梅与石炳毅完成.
通讯作者: 石炳毅, 教授, 100091, 北京市海淀区黑山扈路甲17号, 中国人民解放军第三零九医院器官移植研究所. shibingyi@medmail.com.cn
电话: 010-66775188
收稿日期: 2012-09-20
修回日期: 2012-11-05
接受日期: 2012-11-07
在线出版日期: 2012-11-28
修回日期: 2012-11-05
接受日期: 2012-11-07
在线出版日期: 2012-11-28
Abstract
目的: 改进大鼠肝星状细胞的分离方法, 提高肝星状细胞分离的纯度和活力.
方法: 本研究主要依据Weiskirchen的方法并加以改进, 灌注后即将肝脏从原位分离, 随之使用0.25%的链霉蛋白酶E和0.025%的胶原酶Ⅳ消化, 经DNA酶Ⅰ分散, 筛网过滤、离心, 将细胞沉淀用18%Nycodenz密度梯度离心,获取肝星状细胞. 台盼蓝染色鉴定细胞活率, Desmin免疫细胞化学染色法鉴定肝星状细胞纯度.
结果: 本方法所建立的离体消化分离肝星状细胞方法，每只大鼠肝约获取2.7×107个肝星状细胞, 活率、纯度分别为99%、90%. 该方法可有效减少细胞污染、提高细胞活力，值得广泛应用.
结论: 本文所建立的大鼠离体消化法分离肝星状细胞, 方法简单可行, 较大程度避免了细胞污染, 提高了细胞的存活率和纯度.
Keywords: 肝星状细胞; 细胞分离; 细胞培养