基础研究
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世界华人消化杂志. 2012-11-28; 20(33): 3211-3217
Published online 2012-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v20.i33.3211
鞘氨醇激酶1对结肠癌细胞血管生成拟态的影响及其机制
李梦婷, 黄杰安, 周巧, 苏颖洁, 刘诗权, 覃蒙斌
李梦婷, 黄杰安, 周巧, 苏颖洁, 刘诗权, 覃蒙斌, 广西医科大学第一附属医院消化内科 广西壮族自治区南宁市 530021
李梦婷, 在读硕士, 主要从事结肠癌发病机制的研究.
基金项目: 广西卫生厅基金资助项目, 桂卫重No. 2010016; 广西卫生厅基金资助项目, 桂卫No. GZKZ10-107.
作者贡献分布: 此课题由黄杰安与刘诗权设计; 研究过程由李梦婷、周巧及苏颖洁操作完成; 研究所用试剂及分析工具由黄杰安提供; 数据分析由李梦婷完成; 本论文由李梦婷与覃蒙斌完成.
通讯作者: 黄杰安, 教授, 530021, 广西壮族自治区南宁市双拥路6号, 广西医科大学第一附属医院消化内科. jh23229@gmail.com
电话: 0771-5356501
收稿日期: 2012-07-25
修回日期: 2012-09-09
接受日期: 2012-11-07
在线出版日期: 2012-11-28
Abstract

目的: 研究鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1, Sphk1)对人结肠癌HT-29细胞生成血管拟态(vasculogenic mimicry, VM)的影响及其可能的机制.

方法: 将人结肠癌HT-29细胞分为Sphk1抑制组、Sphk1激活组、对照组. Sphk1抑制组加入N,N-二甲基鞘氨醇(N,N-dimethyl-D-erythro-sphingosine, DMS)50 μmol/L; Sphk1激活组加入佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(phorbol 12-myristate-13-acetate, PMA)100 nmol/L; 对照组加入等量的培养基. 采用MTT法检测细胞生长增殖; 透射电镜观察细胞形态学变化; Matrigel三维培养法观察VM形成能力; Transwell小室模型观察细胞侵袭迁移能力的变化, QT-PCR、Western blot及ELISA技术检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达.

结果: DMS显著抑制细胞的增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡; 透射电镜可见典型的凋亡特征; 三维培养中不能形成管状VM; 明显减弱VEGF mRNA及蛋白表达. PMA则显著促进HT-29细胞的增殖、侵袭、迁移并抑制细胞的凋亡; 透射电镜可观察到细胞增殖特征; 促进三维培养中管状VM的形成; 明显增强VEGF mRNA及蛋白表达. 对照组、DMS组及PMA组的侵袭细胞数: 112.00±6.25 vs 57.00±8.00, 142.00±5.57; 迁移细胞数: 69.33±4.04 vs 42.00±4.16, 111.00±8.03; VEGF mRNA表达量: 1.000 vs 0.740±0.122, 1.220±0.075; VEGF蛋白表达: 0.39±0.05 vs 0.23±0.02, 0.65±0.06; VEGF蛋白分泌: 103.00±8.96 vs 63.89±8.44, 201.01±17.93, 均P<0.05.

结论: Sphk1可促进HT-29细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞的凋亡, 诱导VM的形成, 其机制可能是通过增强结肠癌细胞的侵袭迁移能力并促进VEGF表达而发挥作用.

Keywords: 血管生成拟态; 鞘氨醇激酶-1; 人结肠癌细胞; 血管内皮生长因子; 侵袭能力