Published online 2012-10-28. doi: 10.11569/wcjd.v20.i30.2895
修回日期: 2012-09-05
接受日期: 2012-09-25
在线出版日期: 2012-10-28
目的: 观察siRNA沉默核糖体蛋白L31(ribosomal protein L31, RPL31)基因表达对人胰腺癌PANC-1细胞的影响.
方法: 针对RPL31基因设计了3条siRNA, 使用脂质体LipofectamineTM2000转染人胰腺癌PANC-1细胞, 同时设立空白对照组和阴性对照组, 转染成功后通过实时定量PCR及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测RNA干扰沉默RPL31基因的效果, 四氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖, 流式细胞术检测细胞周期分布, Transwell小室检测细胞迁移, ELISA检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达.
结果: 转染48 h后, 3条siRNA能显著抑制RPL31基因mRNA和蛋白的表达; MTT结果显示, PANC-1细胞增殖明显受到抑制; 细胞周期分布中G0/G1期明显增加、S期减少(G0/G1: 59.85%±5.47% vs 45.71%±3.44%; S: 28.63%±4.52% vs 45.13%±2.64%, 均P<0.05); 转染后细胞迁移数目(178.6个±30.3个)较空白对照组(470.5个±22.8个)与阴性对照组(474.2个±20.4个)明显减少, 差异显著(P<0.05); 转染后PANC-1细胞的VEGF表达量也明显减少[1563.45 pg/(106 cell • 24 h)±24.95 pg/(106 cell • 24 h) vs 2804.6 pg/(106 cell • 24 h)±40.46 pg/(106 cell•24 h), 2791.5 pg/(106 cell • 24 h)±44.77 pg/(106 cell•24 h)].
结论: RPL31 siRNA能明显抑制PANC-1细胞RPL31的表达, 抑制细胞增殖, 降低细胞迁移及VEGF表达, RPL31基因有可能成为胰腺癌基因治疗的新靶点.