研究快报
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世界华人消化杂志. 2012-09-28; 20(27): 2595-2600
Published online 2012-09-28. doi: 10.11569/wcjd.v20.i27.2595
RNAi沉默Sp3基因对肝癌HepG2细胞增殖的影
陆会平, 李佳, 莫伟嘉, 冯振博
陆会平, 李佳, 莫伟嘉, 广西医科大学研究生学院 广西壮族自治区南宁市 530021
冯振博, 广西医科大学第一附属医院病理科 广西壮族自治区南宁市 530021
陆会平, 在读硕士, 主要从事肝癌发病机制和预防的研究.
基金项目: 广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研基金资助项目, No. Z2012052; 广西壮族自治区"新世纪十百千人才工程"专项资金资助项目, No. 2007214.
作者贡献分布: 细胞培养、慢病毒转染、Western blot与RT-PCR等主要实验由陆会平完成, 莫伟嘉协助完成; 数据分析与文章撰写由陆会平完成; 课题指导、文章修改和审阅由李佳与冯振博完成.
通讯作者: 冯振博, 教授, 530021, 广西壮族自治区南宁市双拥路6号, 广西医科大学第一附属医院病理科. zhenbofeng@yahoo.com.cn
电话: 0771-5356534
收稿日期: 2012-07-12
修回日期: 2012-08-14
接受日期: 2012-09-04
在线出版日期: 2012-09-28
Abstract

目的: 采用基因沉默和慢病毒转染技术, 沉默人肝癌细胞HepG2中特异蛋白3(specificity protein 3, Sp3)的表达, 观察沉默Sp3基因后的肝细胞的增殖能力变化.

方法: 采用Sp3-siRNA慢病毒转染人肝癌细胞HepG2, 通过免疫印迹法和PCR技术检测Sp3的表达以验证转染效果, 通过MTT检测细胞生长曲线和流式细胞技术测定细胞周期.

结果: Western blot实验表明, 实验组的Sp3表达量明显少于空白组和阴性对照组(0.37±0.08 vs 0.83±0.17, 0.66±0.13, F = 8.442, 均P<0.05). RT-PCR也得到相同的结果(0.47±0.05 vs 0.74±0.08, 0.70±0.16, F = 7.322, 均P<0.05). MTT实验结果显示, 与空白对照和阴性对照组相比, 实验组细胞在48、72和96 h时的增殖明显受到抑制(0.28±0.18 vs 0.34±0.19, 0.35±0.07, F = 3.888; 0.57±0.11 vs 0.84±0.05, 0.74±0.08, F = 12.721; 0.72±18.1 vs 0.98±0.05, 0.93±0.9, F = 6.342, 均P<0.05). 流式细胞术结果显示实验组细胞主要分布在G1期.

结论: RNAi沉默Sp3基因导致人肝癌HepG2细胞体外增殖能力下降.

Keywords: 肝细胞癌; 特异蛋白3; RNA干扰; Western blot; RT-PCR; 流式细胞术