研究快报
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世界华人消化杂志. 2012-08-28; 20(24): 2254-2258
Published online 2012-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v20.i24.2254
HIF-1α基因RNA干扰质粒在胃癌细胞中的构建与鉴定
龚青, 方淑环, 高国全
龚青, 广州医学院基础学院生化教研室 广东省广州市 510182
方淑环, 广州中医药大学临床药理研究所DME中心 广东省广州市 510405
高国全, 中山大学中山医学院生物化学教研室 广东省广州市 510080
龚青, 博士, 讲师, 主要从事基因工程与基因治疗方面研究.
基金项目: 国家自然科学基金青年基金资助项目, No. 31101003.
作者贡献分布: 本课题由高国全负责提供研究经费、实验的设计和论文申定; 龚青负责主要的实验工作和撰写论文初稿; 方淑环参与部分实验工作和论文撰写讨论.
通讯作者: 高国全, 教授, 510080, 广东省广州市中山二路74号, 中山大学中山医学院生物化学教研室. gaogq@mail.sysu.edu.cn
收稿日期: 2012-05-23
修回日期: 2012-07-23
接受日期: 2012-08-08
在线出版日期: 2012-08-28
Abstract

目的: 构建转录因子HIF-1α表达的RNA干扰(RNA interference, RNAi)质粒, 为研究HIF-1α参与的细胞信号通路及以HIF-1α为靶点的基因治疗提供稳定转染细胞的RNAi.

方法: 选取HIF-1α基因的19 nt特异性序列, 设计针对HIF-1α的shRNA序列, 应用基因重组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体中, 利用EcoRⅠ和ApaⅠ双酶切和DNA测序鉴定重组克隆. 低氧条件下, 将包含HIF-1α基因RNAi序列的重组载体转染人胃癌细胞SGC-7901, 转染48 h后, 收集细胞裂解液, Western blotting分析低氧条件下对照组与转染组HIF-1α蛋白的表达水平.

结果: 双酶切证实shRNA插入pSilencer 1.0-U6质粒, DNA测序证实插入的序列正确; HIF-1α基因RNAi质粒转染胃癌细胞SGC-7901成功; Western blotting结果显示与空质粒对照组比转染组细胞HIF-1α表达下调.

结论: 成功构建人HIF-1α基因RNAi质粒, 为研究HIF-1α参与的细胞信号通路提供了稳定转染细胞的干扰质粒. 同时, 阻断HIF-1α的信号通路将为肿瘤基因治疗提供一个较好的靶点, 研究结果为以HIF-1α为靶向的基因治疗提供了有利工具.

Keywords: 载体; 低氧诱导因子1α; RNA干扰; 胃癌