Copyright
©The Author(s) 2012. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2012-08-08; 20(22): 2030-2035
Published online 2012-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v20.i22.2030
Published online 2012-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v20.i22.2030
大鼠结肠上皮细胞分离及培养方法的建立
祁燕, 李燕舞, 王汝俊, 唐立海, 米红, 广州中医药大学脾胃研究所 广东省广州市 510405
祁燕, 在读博士, 主要从事中药药理研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30772754.
作者贡献分布: 此课题由王汝俊设计; 操作过程由祁燕、李燕舞、唐立海及米红完成; 祁燕与李燕舞完成论文的撰写.
通讯作者: 王汝俊, 教授, 510405, 广东省广州市机场路12号, 广州中医药大学脾胃研究所. pwwrj123456@yahoo.com.cn
电话: 020-36585078
收稿日期: 2012-04-09
修回日期: 2012-06-26
接受日期: 2012-07-20
在线出版日期: 2012-08-08
修回日期: 2012-06-26
接受日期: 2012-07-20
在线出版日期: 2012-08-08
Abstract
目的: 建立大鼠结肠上皮细胞的原代培养方法, 为结肠上皮形态及功能研究提供理想的细胞模型.
方法: 采用6-15日龄乳鼠, 取结肠剪碎、反复清洗后, 弃上清, 加10 mL、0.1%Ⅰ型胶原酶和透明质酸酶联合配制的消化液, 37 ℃消化25 min, 分离上皮细胞团; 吹打消化液, 取上清, 加入培养基重悬反复离心3次后, 细胞沉淀接种于含100 mL/L胎牛血清的完全培养基中, 37 ℃、50 mL/L CO2细胞培养箱中培养. 采用差速贴壁法及相差消化法去除成纤维细胞, 细胞贴壁长满瓶80%-90%后用2.5 g/L的胰酶消化液消化并传代.
结果: 成功分离结肠上皮细胞团且活力较高. 24 h后可见部分细胞团贴壁, 贴壁细胞为多角形, 4-8 d逐渐融合成片, 呈现明显的"铺路石"样. 细胞经传代处理后成纤维细胞明显减少. 免疫荧光染色及透射电镜观察鉴定为上皮细胞. 冻存处理复苏后细胞状态较佳.
结论: 通过该法可建立较稳定的大鼠结肠上皮细胞原代培养体系, 为结肠上皮生理、病理及药物作用机制提供了体外研究平台.
Keywords: 结肠上皮细胞; 原代培养; 细胞系