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世界华人消化杂志. 2012-08-08; 20(22): 2024-2029
Published online 2012-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v20.i22.2024
Published online 2012-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v20.i22.2024
HBV preS1反基因锁核酸的设计及体外对病毒复制的抑制
邓益斌, 右江民族医学院临床学院医学检验中心 广西壮族自治区百色市 533000
温旺荣, 暨南大学第一临床医学院医学检验中心 广东省广州市 510070
邓益斌, 副教授, 2010年暨南大学博士研究生, 主要从事基因诊断与治疗研究.
基金项目: 广西壮族自治区教育厅资助项目, No. 200911MS187.
作者贡献分布: 本研究由邓益斌设计; 实验过程由邓益斌操作完成; 研究经费来源于邓益斌主持的广西教育厅课题; 数据分析由邓益斌完成; 论文写作由邓益斌完成, 温旺荣提出修改意见.
通讯作者: 邓益斌, 副教授, 533000, 广西壮族自治区百色市右江区中山二路18号, 右江民族医学院临床学院医学检验中心. enbin0776@sina.com
电话: 0776-2829434
收稿日期: 2012-05-08
修回日期: 2012-06-30
接受日期: 2012-07-20
在线出版日期: 2012-08-08
修回日期: 2012-06-30
接受日期: 2012-07-20
在线出版日期: 2012-08-08
Abstract
目的: 探讨针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV) preS1 dsDNA同聚嘌呤区设计反基因锁核酸分子, 并观察其在HepG2 2.2.15细胞内抑制病毒复制的效果.
方法: 针对HBV preS1 dsDNA的2 941-2 962 nt、3 015-3 036 nt和3 089-3 110 nt三个同聚嘌呤区, 利用RNA structure软件分别设计合成锁核酸、硫代寡核苷酸、未修饰寡核苷酸及无关对照序列, 以阳离子脂质体介导转染HepG2 2.2.15细胞, 采用荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR)和时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)分别监测1、3、5和7 d细胞培养上清液中HBV DNA和HBsAg的含量; 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测锁核酸对细胞代谢的影响.
结果: 反基因锁核酸对细胞内的HBV DNA复制与HBsAg表达有明显的抑制作用, 且抑制率随时间呈增高趋势, 7 d后抑制率分别为64.32%和67.51%. 各实验组与对照组比较差异均具有统计学意义(均P<0.05), 而封闭2 941-2 962 nt同聚嘌呤靶区的LNA抑制作用最强, 且最适序列长度为20-30 bp. LNA对细胞代谢无明显影响.
结论: 针对preS1 dsDNA同聚嘌呤区的反基因锁核酸分子, 体外能有效抑制HBV的复制, 以封闭2 941-2 962 nt靶位效果最强, 且合适序列长度为20-30 bp.
Keywords: 脂质体; 乙型肝炎病毒; 锁核酸; 反基因治疗