研究快报
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世界华人消化杂志. 2012-07-28; 20(21): 1973-1977
Published online 2012-07-28. doi: 10.11569/wcjd.v20.i21.1973
水通道蛋白3与紧密连接的相关性
张文杰, 徐勇, 王斌, 徐皓
张文杰, 徐勇, 王斌, 徐皓, 南京医科大学第一附属医院胃肠外科 江苏省南京市 210029
张文杰, 硕士, 主要从事胃肠道屏障及消化系肿瘤的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30901421; 江苏省卫生厅开放课题基金资助项目, No. XK03200903.
作者贡献分布: 此课题由徐皓设计; 研究过程由张文杰与徐勇操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由王斌提供; 数据分析由张文杰与徐皓完成; 本论文写作由张文杰与徐勇完成.
通讯作者: 徐皓, 主治医师, 210029, 江苏省南京市广州路300号, 南京医科大学第一附属医院胃肠外科. brightmoon_1@sina.com
电话: 025-85038505
收稿日期: 2011-12-04
修回日期: 2012-01-06
接受日期: 2012-06-30
在线出版日期: 2012-07-28
Abstract

目的: 探讨水通道蛋白3(aquaporin 3, AQP3)对肠黏膜上皮细胞间紧密连接(tight junction, TJ)的影响, 并探讨其可能的作用机制.

方法: 应用Caco-2细胞系在体外构建肠黏膜上皮屏障, 构建沉默AQP3的shRNA慢病毒载体, 建立稳定转染细胞系. 实验分为3组: 空白对照组(BLANK)、阴性对照组(NC)、AQP3干扰组(AQP3 shRNA). Western blot验证TJ相关蛋白Occludin以及Claudin-1的表达情况; 并且采用免疫细胞化学法观察TJ相关蛋白的分布和结构变化.

结果: RT-PCR及Western blot结果显示在Caco-2细胞系中成功沉默AQP3的表达. 干扰组与对照组相比下降约75%. Western blot结果显示AQP3干扰组TJ相关蛋白Occludin以及Claudin-1的表达明显降低. 免疫细胞化学结果显示Caco-2细胞间Occludin以及Claudin-1主要表达在细胞膜和/或胞浆中, Occludin和Claudin-1细胞间棕褐色颗粒减少, 结构变模糊. 相邻Caco-2细胞间TJ结构遭到破坏.

结论: 靶向AQP3的shRNA技术可以引起TJ的结构变化和相关蛋白的表达分布的异常.

Keywords: 水通道蛋白3; Caco-2; 紧密连接