基础研究
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世界华人消化杂志. 2012-07-08; 20(19): 1720-1725
Published online 2012-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v20.i19.1720
慢病毒介导的重组人α1-抗胰蛋白酶在小鼠体内的表达
欧海龙, 雷霆雯, 李红梅, 王筑婷, 莫晓川
欧海龙, 雷霆雯, 李红梅, 王筑婷, 莫晓川, 贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室 贵州省贵阳市 550004
欧海龙, 博士, 主要从事分子遗传学方向的研究.
作者贡献分布: 此课题由欧海龙设计; 研究过程由欧海龙、雷霆雯、李红梅、王筑婷及莫晓川操作完成; 数据分析和论文写作由欧海龙完成.
通讯作者: 欧海龙, 副教授, 550004, 贵州省贵阳市北京路9号, 贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室. ouhailong@hotmail.com
电话: 0851-6908068
收稿日期: 2012-03-13
修回日期: 2012-04-30
接受日期: 2012-06-01
在线出版日期: 2012-07-08
Abstract

目的: 构建重组人α1-抗胰蛋白酶(hAAT)因子的慢病毒表达载体, 并通过体外细胞水平和小鼠体内分析其表达情况.

方法: 通过RT-PCR的方法扩增出hAAT基因的编码序列, 并构建重组慢病毒质粒; 经体外包装后, 感染鼠成纤维细胞及注射小鼠. 荧光显微镜下观察GFP的表达情况, 同时对收获的细胞及感染小鼠的肝脏或血浆进行Western blot、ELISA检测.

结果: 获得重组hAAT因子的慢病毒表达质粒pLVX-ser; 包装后得到8×106 TU/mL滴度的慢病毒颗粒. 通过荧光显微镜下观察, 显示重组hAAT因子在成纤维细胞中正常表达; 对小鼠尾静脉注射病毒之后, 进行hAAT因子检测, Western blot结果说明hAAT因子在小鼠体内成功表达; 通过ELISA检测发现hAAT在小鼠体内的表达平均达190 μg/L左右, 而且在慢病毒的介导下hAAT在小鼠中的表达可持续3 mo以上.

结论: 重组慢病毒载体可高效、持续表达hAAT因子, 为通过基因工程生产重组hAAT因子以及为α1-AT缺乏症的基因治疗奠定基础.

Keywords: α1-抗胰蛋白酶; α1-AT缺乏症; 慢病毒