基础研究
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世界华人消化杂志. 2012-01-08; 20(1): 22-26
Published online 2012-01-08. doi: 10.11569/wcjd.v20.i1.22
敲除PPK基因对幽门螺杆菌逃避巨噬细胞免疫清除的影响
杨诏旭, 路程伊, 杨宾, 夏宁, 窦科峰
杨诏旭, 杨宾, 夏宁, 窦科峰, 中国人民解放军第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科 陕西省西安市 710032
路程伊, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院信息科 陕西省西安市 710032
杨诏旭, 主治医师, 主要研究方向是肝胆胰脾外科.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81000164.
作者贡献分布: 本课题主要由杨诏旭设计并完成; 由窦科峰协助设计; 研究过程由杨诏旭与杨宾操作完成; 研究所用试剂由杨诏旭提供; 数据分析由路程伊与夏宁完成; 本论文写作由杨诏旭与路程伊完成.
通讯作者: 杨诏旭, 主治医师, 博士, 710032, 陕西省西安市, 中国人民解放军第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科. yangzx@fmmu.edu.cn
电话: 029-84775260
收稿日期: 2011-10-24
修回日期: 2011-11-20
接受日期: 2011-12-01
在线出版日期: 2012-01-08
Abstract

目的: 研究敲除多聚磷酸激酶(polyphosphate kinase, PPK)基因后对幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)逃避巨噬细胞免疫清除的影响.

方法: 通过同源重组的原理构建H. pylori PPK敲除菌株. 提取PPK敲除菌株体内多聚磷酸盐, 转化为ATP进行定量, 并与野生型菌株内多聚磷酸盐水平进行比较. 将PPK敲除菌株及野生型菌株分别与小鼠巨噬细胞系RAW264.7共同培养, 比较存活的H. pylori数量.

结果: 成功构建敲除PPK的H. pylori菌种. Western blot显示该菌无PPK蛋白表达. 对敲除PPK的H. pylori菌株中的多聚磷酸盐定量结果显示, 其内PP含量为0.46±0.25 nmol Pi/mg Protein, 显著低于G27野生菌种(175.33±21.22 nmol Pi/mg Protein, P<0.01). 将该菌株与小鼠巨噬细胞系RAW264.7共同培养, 2 h时间点, G27及G27DPPK菌种在巨噬细胞内的存活无显著差异; 而在24 h时间点, G27DPPK菌种在巨噬细胞内的存活率显著低于野生型G27菌种, 巨噬细胞内的BacLight kit染色结果显示, G27DPPK菌种在巨噬细胞内获得染色的活菌显著低于野生型G27菌种.

结论: PPK是H. pylori合成多聚磷酸盐的关键酶. 敲除该基因后, H. pylori合成多聚磷酸盐的能力显著下降, 其逃避巨噬细胞清除的能力明显减弱.

Keywords: 幽门螺旋杆菌; 多聚磷酸激酶; 巨噬细胞