修回日期: 2011-03-03
接受日期: 2011-03-08
在线出版日期: 2011-03-28
目的: 探讨联合转染Survivin短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)和CD44v3 shRNA对结直肠癌SW480细胞增殖和侵袭能力的影响, 为结直肠癌的基因治疗提供实验依据.
方法: 设计并构建能够稳定转录shRNA并干扰Survivin和CD44v3分子表达的质粒, 将其单独及联合转染结直肠癌SW480细胞后, 分阴性对照组、空白质粒对照组, Survivin组、CD44v3组和共转染组. Western blot检测转染后Survivin和CD44v3蛋白表达的变化, 流式细胞仪及MTT法检测细胞凋亡和细胞增殖的变化, Transwell小室检测细胞迁移能力的改变.
结果: 测序证明表达载体构建成功, 共转染组Survivin和CD44v3的蛋白表达抑制率分别为84.2%±0.3%和77.3%±0.1%, 与单独转染组相比差异有统计学意义(P<0.05). 转染120 h后, 共转染组、Survivin组和CD44v3组细胞生长抑制率分别为44.3%±0.1%、21.5%±0.2%、26.4%±0.2%, 共转染组抑制效果最明显(P<0.05), 总凋亡率分别为37.6%±2.3%、20.0%±0.4%、21.6%±1.6%, 共转染组凋亡率最高(P<0.05), 小室穿膜细胞数分别为66.12个±4.04个, 89.35个±3.06个、93.53个±5.13个, 共转染组与各组差异显著(P<0.05).
结论: Survivin shRNA和CD44v3 shRNA可分别下调Survivin和CD44v3蛋白的表达, 抑制结直肠癌细胞的增殖, 促进其凋亡, 减弱其迁移能力, 而两者的联合转染能进一步抑制细胞的生长增殖, 减弱细胞的侵袭能力.