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溶癌水泡性口炎病毒体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制
连海, 汤晶, 孙玉成, 张爽, 军事医学科学院十一所基础研究室 吉林省长春市 130122
连海, 助理研究员, 主要从事病毒及其结构蛋白诱导细胞凋亡的信号传导机制研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 31001070;吉林省科技发展计划基金资助项目, No. 20100146.
作者贡献分布: 此课题由连海设计; 研究过程由连海、汤晶及张爽操作完成; 数据分析由连海与孙玉成完成; 本论文写作由连海与汤晶完成.
通讯作者: 连海, 助理研究员, 130122, 吉林省长春市, 军事医学科学院十一所基础研究室. lhhuman@163.com
电话: 0431-86985916
收稿日期: 2010-12-23
修回日期: 2011-02-21
接受日期: 2011-03-02
在线出版日期: 2011-03-08
修回日期: 2011-02-21
接受日期: 2011-03-02
在线出版日期: 2011-03-08
Abstract
目的: 研究一株实验室减毒水泡性口炎病毒(VSV)对HepG2细胞的凋亡诱导作用, 并探讨其可能的作用机制.
方法: 首先将水泡性口炎病毒以1.0感染复数(MOI)的接种密度感染HepG2细胞, 同时设接种相同体积培养液的Mock感染组, 在不同时间点收集细胞, MTT法检测细胞增殖活性; AO/EB结合Hoechst/PI染色观察细胞凋亡形态学变化; Annexin V-FITC/PI双染法检测早期凋亡细胞数目; PI染色结合细胞周期分析sub-G1凋亡峰值; JC-1染色测定细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)水平; 比色法检测caspase-3, caspase-8及caspase-9的活性变化.
结果: 减毒VSV感染HepG2细胞后, 随着感染时间的增加, HepG2细胞存活率明显降低. VSV感染HepG2细胞24 h后, 早期凋亡细胞数高于Mock感染组(26.46%±6.01% vs 4.86%±2.28%, t = -5.817, P<0.01); sub-G1峰细胞数高于Mock感染组(14.07%±3.83% vs 3.99%±1.36%, t = -4.293, P<0.05); HepG2细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)明显降低(t = -4.586, P<0.05); caspase-9和caspase-3的活性显著升高(P<0.05或P<0.01).
结论: 人肝癌细胞HepG2是VSV敏感细胞株, VSV感染HepG2导致细胞线粒体ΔΨm下降, 激活caspase-9进而活化下游caspase-3, 最终通过内源性线粒体通路诱导细胞凋亡.
Keywords: 水泡性口炎病毒; 肝细胞癌; 凋亡; HepG2细胞