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RNA干扰Akt对食管癌细胞株Eca109生物学特性的影响
丁宗励, 施瑞华, 朱宏, 凌亭生, 郝波, 南京医科大学第一附属医院消化科 江苏省南京市 210029
丁宗励, 在读硕士, 主要从事消化系肿瘤早期发病机制方面的研究.
基金项目: 江苏省"六大人才高峰"基金资助项目.
作者贡献分布: 该课题由丁宗励、施瑞华及朱宏共同设计; 研究过程由丁宗励与郝波在施瑞华指导下完成; 所用试剂及分析工具由施瑞华提供; 数据分析由丁宗励、凌亭生及郝波完成; 论文写作由丁宗励与施瑞华完成.
通讯作者: 施瑞华, 教授, 210029, 江苏省南京市广州路300号, 南京医科大学第一附属医院消化科. ruihuashi@126.com
电话: 025-83718836-6973
收稿日期: 2010-11-08
修回日期: 2010-12-28
接受日期: 2011-01-06
在线出版日期: 2011-02-18
修回日期: 2010-12-28
接受日期: 2011-01-06
在线出版日期: 2011-02-18
Abstract
目的: 探讨RNA干扰沉默Akt对人食管鳞癌细胞体外增殖、迁移及血管生成拟态(VM)形成的影响.
方法: 应用倒置荧光显微镜观察Akt的干扰质粒转染食管癌细胞Eca109后绿色荧光蛋白的表达; 采用Western blot方法检测Akt蛋白的表达; 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化; Transwell方法检测干扰前后细胞迁移能力的变化; 取24孔培养板每孔加入300 μL Matrigel原液, 待其凝固, 每孔内接种1 mL浓度为5×105/mL的各组细胞悬液, 培养12 h后观察并计数转染前后各组细胞的管状结构数量.
结果: Eca109/8单克隆干扰效果好, Western blot结果显示几乎无Akt表达. Akt被干扰后, 细胞增殖能力明显减弱(P<0.05), 运动迁移能力显著下降, 与未转染的细胞相比穿过人工基底膜的细胞数明显减少(59.33±2.87 vs 130.5±2.22, P<0.05). 三维培养提示干扰后细胞的管状结构数量明显减少(P<0.05).
结论: RNA干扰可引起Eca109中Akt的沉默, 而Akt表达下调后食管癌细胞株Eca109的增殖与迁移能力及VM能力均减弱. 推测阻断Akt通路有可能成为治疗人食管鳞癌的新靶点.
Keywords: 食管鳞癌; Akt; 转染; RNA干扰; 血管生成拟态