基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-11-28; 19(33): 3402-3408
Published online 2011-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v19.i33.3402
ShRNA靶向干扰EGFR抑制结直肠癌细胞增殖的机制
闵寒, 陈志荣, 张舒羽, 周俊东, 胡群超, 孟星君, 吴锦昌
闵寒, 陈志荣, 南京医科大学附属苏州医院 苏州市立医院东区消化科 江苏省苏州市 215001
张舒羽, 苏州大学放射医学与公共卫生学院 江苏省苏州市 215000
周俊东, 胡群超, 孟星君, 吴锦昌, 南京医科大学附属苏州医院 苏州市立医院东区肿瘤放疗科 江苏省苏州市 215001
闵寒, 硕士, 主治医师, 主要从事消化系肿瘤的靶向治疗研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81102078;苏州市科教兴卫青年科技基金资助项目, No. SWKQ1026;苏州市科技发展指导基金资助项目, No. SZD09132.
作者贡献分布: 闵寒与陈志荣对此文所作贡献均等; 此课题由闵寒、陈志荣、周俊东及张舒羽共同设计; 研究所用试剂及分析工具由闵寒、吴锦昌及张舒羽提供; 研究过程由闵寒、胡群超、孟星君及张舒羽操作完成; 数据分析由闵寒与陈志荣完成; 本论文写作由闵寒、陈志荣及吴锦昌完成.
通讯作者: 吴锦昌, 教授, 主任医师, 博士生导师, 215001, 江苏省苏州市, 南京医科大学附属苏州医院, 苏州市立医院东区肿瘤放疗科. wjinchang@sina.com
电话: 0512-62364002
收稿日期: 2011-09-25
修回日期: 2011-10-28
接受日期: 2011-11-04
在线出版日期: 2011-11-28
Abstract

目的: 从细胞周期的角度探讨RNA干扰抑制表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)表达对结直肠癌细胞增殖影响的机制.

方法: 以人结直肠癌细胞HCT-15为研究对象, 构建EGFR-短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)载体, 采用脂质体转染的方法转染细胞, G418筛选稳定细胞株以获得稳定的转染细胞模型, 分为4组: 转染shRNA-NC, 转染shRNA-1组, 转染shRNA-2组, 转染shRNA-3组; 应用半定量RT-PCR和流式细胞术检测转染细胞模型的mRNA和蛋白表达水平; 应用平板克隆实验检测转染后细胞增殖能力; 应用流式细胞术检测转染后细胞周期的变化.

结果: 正确构建了shRNA质粒表达载体, 成功转染; 转染shRNA-1、2、3组较转染shRNA-NC组mRNA、蛋白表达水平均有下降, 以转染shRNA-1和2组的抑制效应好(40.2%±3.2%, 52.8%±11.3%); 转染shRNA-1、2两组较对照组增殖能力下降, G0/G1期细胞增多(63.69±2.75%, 60.10±2.00% vs 51.08±3.42%)、S期细胞减少 (28.20%±2.42%, 27.19%±1.95% vs 36.11±1.84%), 差异有统计学意义(P<0.05).

结论: RNA干扰技术可以有效地抑制HCT-15细胞EGFR表达, 并抑制了细胞增殖能力, 这可能与诱导细胞出现G0/G1期阻滞有关.

Keywords: RNA干扰; 表皮生长因子受体; 细胞周期; 结直肠癌