基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-11-28; 19(33): 3397-3401
Published online 2011-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v19.i33.3397
RNA干扰DNMT1基因对胰腺癌细胞BxPC-3增殖的影响及相关机制
肖卫东, 李勇, 李学明, 蔡军, 曾林山, 胡伟
肖卫东, 李勇, 李学明, 蔡军, 曾林山, 胡伟, 南昌大学第一附属医院普外科 江西省南昌市 330006
肖卫东, 副教授, 医学博士, 主要从事肝胆胰疾病的基础与临床研究.
基金项目: 江西省教育厅科学技术研究基金资助项目, No. GJJ08077;江西省自然科学基金资助项目, No. 2010GZY0316.
作者贡献分布: 此课题由肖卫东与李勇设计; 研究过程由肖卫东、李学明、蔡军、曾林山及胡伟操作完成; 数据分析和论文写作由肖卫东与李勇完成.
通讯作者: 肖卫东, 副教授, 330006, 江西省南昌市, 南昌大学第一附属医院普外科. frankxwd@126.com
收稿日期: 2011-09-01
修回日期: 2011-10-28
接受日期: 2011-11-04
在线出版日期: 2011-11-28
Abstract

目的: 探讨RNA干扰DNMT1基因对胰腺癌细胞BxPC-3增殖的影响及相关机制.

方法: 利用LipofectamineTM2000转染DNMT1-siRNA至胰腺癌细胞BxPC-3. 实验共分为3组: 实验组(转染DNMT1-siRNA)、阴性对照组(转染negative-siRNA)和空白对照组(转染脂质体). 转染48 h后, 应用荧光定量PCR法和Western blot法分别检测细胞中DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平; MTT法检测细胞体外增殖活力; FCM法检测细胞凋亡; 甲基化特异性PCR法(MSP)检测抑癌基因p16、RASSF1A和ppENK的启动子甲基化状态.

结果: 与空白对照组和阴性对照组相比, 实验组的DNMT1 mRNA及蛋白表达量均显著降低(P<0.01); 实验组细胞增殖明显受到抑制(P<0.05), 细胞凋亡率明显增加(44.46%±5.98% vs 3.74%±1.02% vs 5.07%±1.16%, P<0.01). 空白对照组与阴性对照组的p16、RASSF1A和ppENK基因甲基化阳性, 而实验组的p16和ppENK基因甲基化阴性, RASSF1A基因部分甲基化.

结论: DNMT1基因表达下调后, 能抑制胰腺癌细胞BxPC-3细胞增殖, 并能诱导其发生细胞凋亡; 其作用机制与抑癌基因p16、RASSF1A和ppENK去甲基化有关.

Keywords: 胰腺肿瘤; DNA甲基转移酶1; RNA干扰; 细胞增殖; 细胞凋亡; 抑癌基因