临床研究
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世界华人消化杂志. 2011-11-18; 19(32): 3302-3307
Published online 2011-11-18. doi: 10.11569/wcjd.v19.i32.3302
TSC2反义寡核苷酸对人食管癌EC9706细胞增殖、凋亡的影响
冯付明, 杨娟, 张红, 赵路, 于婧, 李晟磊, 陈奎生
冯付明, 杨娟, 张红, 赵路, 于婧, 李晟磊, 陈奎生, 郑州大学第一附属医院病理科 郑州大学基础医学院病理教研室 河南省肿瘤病理重点实验室 河南省郑州市 450052
冯付明, 硕士研究生, 副主任医师, 主要从事肿瘤病的研究.
基金项目: 河南省基础与前沿技术研究计划基金资助项目, No. 092300410016; 河南省杰出青年科学基金资助项目, No. 74100510009; 河南省科技攻关计划基金资助项目, No. 082102310011.
作者贡献分布: 冯付明与陈奎生对此文所作贡献均等; 此课题由陈奎生与李晟磊共同设计; 研究过程由冯付明、杨娟、张红、赵路及于婧共同操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由李晟磊提供; 数据分析由冯付明完成; 本论文写作由杨娟、张红、赵路、于婧、李晟磊及陈奎生共同完成.
通讯作者: 陈奎生, 博士, 教授, 450052, 河南省郑州市, 郑州大学第一附属医院病理科. chenksh2002@yahoo.com. cn
收稿日期: 2011-09-20
修回日期: 2011-10-15
接受日期: 2011-11-04
在线出版日期: 2011-11-18
Abstract

目的: 探讨抑癌基因TSC2反义寡核苷酸对人食管癌EC9706细胞增殖、凋亡的影响.

方法: 运用阳离子脂质体介导TSC2的反义寡聚核苷酸(ASODN)转染食管癌EC9706细胞, 并分5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L3组作为实验组. 以终浓度为15 μmol/L正义寡核苷酸(SODN)/无关寡核苷酸(N-ODN)及未转染组分别作为无关对照组、细胞对照组. 分别在转染后连续培养24 h、48 h、72 h 这3个不同时间点, 用MTT检测细胞的增殖情况; 免疫细胞化学检测TSC2蛋白表达; RT-PCR检测tsc2 mRNA表达. 用TUNEL检测转染后48 h细胞的凋亡情况.

结果: 同一时间点, 不同浓度的TSC2反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞增殖有不同的促进作用, 实验组与正义组、无关组及正常对照组相比, 差异有统计学意义(P<0.05), 以浓度为15 μmol/L作用最强; 实验组各组凋亡指数均低于对照组, 且与对照组相比, 差异具有统计学意义(13.11±0.13, 9.31±0.29, 4.38±0.43 vs 16.46±0.43, 16.63±0.34, 16.23±0.45, 均P<0.05). 同一浓度的TSC2反义寡核苷酸, 在不同时间点对食管癌EC9706细胞增殖的促进作用, 随时间的增加而增强, 以72 h作用最强. 同一时间, 不同浓度的TSC2反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞TSC2基因的表达有不同程度的抑制作用, 实验组与正义、无关及正常对照组相比, 差异有统计学意义(F蛋白 = 50.60、330.69及1221.28, 均P<0.05; FmRNA = 260.23、572.22及1004.35, 均P<0.05), 以浓度为15 μmol/L作用最强; 同一浓度的TSC2反义寡核苷酸, 在不同时间内对食管癌EC9706细胞TSC2基因的表达的抑制作用, 随时间的增加而增强, 以72 h作用最强.

结论: 抑癌基因TSC2反义寡核苷酸可促进食管癌EC9706细胞增殖、抑制其凋亡.

Keywords: TSC2; 反义寡核苷酸; EC9706细胞; 增殖; 凋亡