临床研究
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世界华人消化杂志. 2011-11-08; 19(31): 3222-3228
Published online 2011-11-08. doi: 10.11569/wcjd.v19.i31.3222
胃癌Pdx1启动子载体构建及其受DNA甲基化的调节
马娟, 刘庆华, 王蓓蓓, 廖山婴, 沙卫红, 王启仪
马娟, 王蓓蓓, 廖山婴, 沙卫红, 王启仪, 广东省人民医院 广东省医学科学院消化内科 广东省广州市 510080
刘庆华, 中山大学附属第一医院肾内科 广东省广州市 510080
马娟, 博士, 主治医师, 主要从事消化系肿瘤的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81001112; 广东省自然科学基金资助项目, No. 9451008004002824.
作者贡献分布: 马娟与刘庆华对此文所作贡献均等; 此课题由马娟与王启仪设计; 主要研究内容由马娟与刘庆华操作完成; 研究所用部分新试剂及分析工具由沙卫红与廖山婴提供; 数据分析由马娟与王蓓蓓完成; 本论文写作由马娟完成, 刘庆华参与修改.
通讯作者: 王启仪, 主任医师, 510080, 广东省广州市, 广东省人民医院/广东省医学科学院消化内科. mjlqh@163.com
电话: 020-83827812
收稿日期: 2011-09-27
修回日期: 2011-11-02
接受日期: 2011-11-04
在线出版日期: 2011-11-08
Abstract

目的: 构建胰十二指肠同源盒基因1 (pancreatic duodenum homeobox 1, Pdx1)启动子调控的荧光素酶基因表达载体, 筛选Pdx1启动子, 探讨Pdx1启动子活性受DNA甲基化的影响.

方法: 针对Pdx1基因启动子区域进行PCR扩增, 经限制性酶切法将扩增产物克隆至荧光素酶基因报告载体中, 构建pGL3-Pdx1重组质粒. 荧光素酶检测法检测胃癌细胞中Pdx1各段报告基因的启动子活性, 并用DNA甲基化酶SssI处理胃癌细胞, 比较各报告基因的启动子活性变化.

结果: 经过酶切和PCR法鉴定成功构建了9个携带Pdx1启动子的重组荧光素酶基因报告载体; 荧光素酶检测法显示与pGL3-basic比较, 含有F383的3个报告基因F383、F720和F1039有强启动子活性, 组间比较无显著性差异; 与对照组比较, SssI甲基化酶处理的F383、F720和F1039启动子活动明显降低(P<0.05).

结论: 成功获得由Pdx1启动子调控的荧光素酶基因表达载体, 并筛选出具有强启动子活性的3个报告基因(F383、F720和F1039), 且其启动子活性受DNA甲基化影响. 其中F383可能是Pdx1启动子核心, 这些结果为研究胃癌中Pdx1基因沉默的表观遗传学机制建立了基础.

Keywords: 胃癌; 胰十二指肠同源异型基因1; 启动子; 载体构建; 甲基化