基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-01-28; 19(3): 233-239
Published online 2011-01-28. doi: 10.11569/wcjd.v19.i3.233
ITF对PAF引起的肠上皮细胞骨架F-actin破坏的抑制作用
许玲芬, 滕旭, 吴捷, 郭静, 毛志芹, 孙梅
许玲芬, 滕旭, 吴捷, 郭静, 毛志芹, 孙梅, 中国医科大学附属盛京医院儿科 辽宁省沈阳市 110004
许玲芬, 博士, 副教授, 主要从事小儿消化系统疾病方面的研究.
基金项目: 高等学校博士学科点专项科研基金资助项目, No. 20092104 110010; 辽宁省教育厅科技计划基金资助项目, No. L2010624; 辽宁省博士启动基金资助项目, No. 20101147
作者贡献分布: 许玲芬与孙梅对此文所作贡献均等; 此课题由许玲芬与孙梅设计; 研究过程由许玲芬、滕旭、吴捷、郭静及毛志芹操作完成; 数据分析由许玲芬、滕旭及孙梅完成; 本论文写作由许玲芬与孙梅完成.
通讯作者: 孙梅, 教授, 主任医师, 博士生导师, 110004, 辽宁省沈阳市和平区三好街36号, 中国医科大学附属盛京医院儿科. sunm@sj-hospital.org
电话: 024-96615-56311
收稿日期: 2010-10-29
修回日期: 2010-12-06
接受日期: 2010-12-15
在线出版日期: 2011-01-28
Abstract

目的: 探讨血小板活化因子(PAF)对肠上皮细胞骨架F-actin的影响以及肠三叶因子(ITF)对此影响的抑制作用.

方法: 体外培养人结肠腺癌细胞株Caco-2, 分为4组. 对照组: 不加刺激物及干预因素; 实验组: 加入PAF, 终浓度分别为0、50、100和200 nmol/L, 作用24 h; PAF 100 nmol/L, 分别作用0、2、4、8、12、24、48 h; ITF预防组: 先加入ITF 0.3 mol/L, 30 min后加入PAF 100 nmol/L; ITF治疗组: 先加入PAF 100 nmol/L, 30 min后加入ITF 0.3 mol/L, 24 h后进行实验. 应用跨上皮电阻(TEER)反映肠上皮细胞屏障通透性; 免疫荧光染色法观察F-actin的定位、重排以及形态学变化; 流式细胞术对F-actin蛋白进行定量分析.

结果: 给予50 nmol/L PAF, 作用8-12 h即可引起TEER的下降, PAF 100 nmol/L作用24 h, TEER降到最低点, 与对照组相比, 差异显著(232.75 Ω/cm2±15.74 Ω/cm2vs 346.75 Ω/cm2±26.69 Ω/cm2, P<0.01); 预防或治疗性给予ITF, TEER有所恢复, 与模型组相比, 差异显著(313.75 Ω/cm2±18.28 Ω/cm2, 299 Ω/cm2±13.16 Ω/cm2vs 232.75 Ω/cm2±15.74 Ω/cm2, 均P<0.01). TRITC-phalloidin直接免疫荧光染色显示正常Caco-2细胞, F-actin主要环绕于细胞周边, 排列紧密圆滑, 无明显间隙, 细胞界限清晰. PAF 100 nmol/L作用24 h后, F-actin出现重排, 断裂, 周边肌动蛋白丝带模糊, 部分细胞出现横跨细胞的应力纤维结构. 预防或治疗性给予ITF后, 具有正常F-actin染色的细胞比例增加, 周边肌动蛋白丝带逐渐清晰, 胞质内应力纤维减少, 但环点状断裂未完全修复. 预防组作用更强. 以TRITC-phalloidin的相对平均荧光强度表示F-actin的含量, 经流式细胞仪检测发现PAF 100 nmol/L作用24 h后, F-actin含量明显减少(218.56±23.18 vs 425.35±40.31, P<0.01), 给予ITF后F-actin的含量有所增加, 与模型组相比差异显著(391.76±58.57, 360.86±8.68 vs 218.56±23.18, 均P<0.01), 但仍低于对照组.

结论: PAF可以改变肠上皮细胞骨架F-actin的定位及定量, 从而影响肠上皮细胞屏障功能; ITF可以通过抑制F-actin重排, 恢复F-actin蛋白定量而稳定细胞骨架.

Keywords: 血小板活化因子; 肠三叶因子; 纤维状肌动蛋白; 细胞骨架