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世界华人消化杂志. 2011-09-28; 19(27): 2822-2828
Published online 2011-09-28. doi: 10.11569/wcjd.v19.i27.2822
Published online 2011-09-28. doi: 10.11569/wcjd.v19.i27.2822
靶向Plk1的siRNA对肝癌细胞凋亡的影响
孙威, 刘宝林, 陈爱山, 曹献馗, 苏琪, 中国医科大学附属盛京医院结直肠、肛门病外科 辽宁省沈阳市 110004
孙威, 博士, 讲师, 中国医科大学附属盛京医院结直肠、肛门病外科, 主要从事消化系肿瘤的治疗.
作者贡献分布: 本文由孙威、刘宝林及苏琪设计; 研究过程及数据分析由孙威、刘宝林、陈爱山及曹献馗完成, 苏琪审定.
通讯作者: 苏琪, 教授, 110004, 辽宁省沈阳市, 中国医科大学附属盛京医院结直肠、肛门病外科主任. suq@sj-hospital.org
电话: 024-96615-31914
收稿日期: 2011-07-25
修回日期: 2011-09-15
接受日期: 2011-09-25
在线出版日期: 2011-09-28
修回日期: 2011-09-15
接受日期: 2011-09-25
在线出版日期: 2011-09-28
Abstract
目的: 观察靶向作用于Plk1的siRNA对肝癌细胞系BCL-7402细胞中Plk1基因和p53基因表达及细胞凋亡的影响, 探求靶向该基因的治疗在肝癌基因治疗中的可行性及效应.
方法: 设计合成两对靶向作用于Plk1基因的双链siRNA序列, 分别命名为siRNA1和siRNA2, 应用脂质体法将其转入BCL-7402细胞中. 实验分为siRNA1、siRNA2、无关对照及空白对照4组. 通过RT-PCR检测各组细胞中Plk1 mRNA表达的变化; Western blot检测各组细胞中Plk1和P53蛋白表达的变化; 流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的改变; 透射电镜观察细胞超微结构的变化.
结果: 转染后24 h和48 h, Plk1 mRNA相对水平siRNA1组分别较无关对照组和空白对照组下降了50%、51%和60%、62%, siRNA2组分别较无关对照组和空白对照组下降了42% 、42%和54%、56%, siRNA1组、siRNA2组的Plk1 mRNA相对水平与无关对照组和空白对照组相比有统计学差异(P<0.01). Plk1蛋白表达的变化趋势与Plk1 mRNA的变化趋势相似, P53蛋白的表达随着Plk1表达的抑制而明显增加(P<0.01). 转染后24 h, 转染组中G2/M期的细胞数量明显增加(P<0.01). 转染后48 h, 转染组中出现大量的凋亡细胞, 透射电镜下可见凋亡早期及晚期形态学改变.
结论: 靶向作用于Plk1的siRNA能够抑制肝癌细胞系BCL-7402细胞中Plk1基因的表达, 同时增加p53基因的表达, 促进转染细胞的凋亡, 提示Plk1基因在对肝癌细胞的细胞周期及凋亡的调控中起重要作用.
Keywords: 小干扰RNA; 保罗样激酶1; 肝脏肿瘤; BCL-7402细胞; 细胞凋亡