基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-09-28; 19(27): 2810-2815
Published online 2011-09-28. doi: 10.11569/wcjd.v19.i27.2810
靶向ING1基因的miR-622真核表达载体在胃癌细胞MKN-45中的鉴定及其功能
王凯, 李乐平, 郭琼行, 苗瑞政, 程力, 靖昌庆, 王金申
王凯, 李乐平, 郭琼行, 苗瑞政, 程力, 靖昌庆, 王金申, 山东大学附属省立医院胃肠外科 山东省济南市 250021
王凯, 硕士研究生, 主要从事胃肠道肿瘤发生机制的研究.
基金项目: 山东省自然科学基金资助项目, No. Y2007C127.
作者贡献分布: 郭琼行与李乐平对此文所作贡献均等; 此课题由王凯、程力及李乐平设计; 实验过程由王凯操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由靖昌庆与苗瑞政提供; 数据分析由王金申完成; 本论文写作由王凯完成.
通讯作者: 郭琼行, 主任医师, 250021, 山东省济南市, 山东大学附属省立医院胃肠外科. guoqiongxing66@163.com
电话: 0531-85186388
收稿日期: 2011-06-17
修回日期: 2011-09-15
接受日期: 2011-09-26
在线出版日期: 2011-09-28
Abstract

目的: 研究构建靶向ING1基因的miR-622真核表达载体并验证其转染人胃癌细胞株MKN-45细胞后对ING1基因的干扰效果及其功能.

方法: 将外源性重组真核表达载体pSuper/miR-622转染到人胃癌细胞株MKN-45内, 经G418筛选并建立高表达miR-622的稳定转染胃癌细胞株. 稳定表达该miR-622的胃癌细胞为: MKN-45-pSuper/miR-622组, 转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组(MKN-45-pSuper 组和MKN-45组), 采用实时荧光定量PCR验证miR-622在稳定转染细胞的表达, 蛋白印迹检测其对ING1基因表达的干扰效果, 通过细胞增殖和周期实验验证miR-622在胃癌细胞MKN-45中的功能.

结果: 与pSuper空载体组相比, 转染了pSuper/miR-622高表达质粒的MKN-45细胞中ING1蛋白表达明显减少, 降低了4.63倍(1.83±0.86 vs 8.47±1.43, P<0.05); 与转染pSuper空载体的MKN-45细胞对照组相比, 转染了pSuper/miR-622高表达质粒的MKN-45细胞地促进了胃癌细胞增殖(P<0.05), 而转染了pSuper空载体的MKN-45细胞组与正常组组间无统计学意义(P>0.05). pSuper/miR-622组在胃癌细胞G0/ G1期为21.45±0.16而pSuper空载体组48.21±0.34; pSuper/miR-622组在胃癌细胞G2/M期为53.67±0.41而pSuper空载体组20.27±0.18, 与pSuper空载体组细胞相比较, miR-622的高表达促进了胃癌细胞周期的演化.

结论: miR-622真核表达载体构建和稳定表达胃癌细胞筛选成功, 为继续深入的研究miR-622在胃癌中的功能奠定了基础.

Keywords: 胃癌; 微小RNA-622; 表达载体; MKN-45细胞