基础研究
Copyright ©The Author(s) 2011. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2011-09-18; 19(26): 2730-2734
Published online 2011-09-18. doi: 10.11569/wcjd.v19.i26.2730
真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1/PAK-1的构建及其在结直肠癌SW480细胞内的表达
武金宝, 党彤, 陈学清, 张振书, 张宏权, 宋于刚
武金宝, 党彤, 包头医学院第二附属医院内蒙古消化病研究所 内蒙古自治区包头市 014030
陈学清, 广州医学院第一附属医院消化内科 广东省广州市 510510
张振书, 宋于刚, 南方医科大学南方医院消化研究所 广东省广州市 510515
张宏权, Karolinska Institute Department of Biosciences and Nutrition, Sweden Huddinge SE-141 57; 北京大学基础医学院分子细胞生物学与肿瘤生物学研究室 北京市 100191
武金宝, 副主任医师, 主要从事消化疾病的研究工作.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30570839; 内蒙古自治区自然科学基金资助项目, No. 2010MS1101; 内蒙古自治区高等学校科学研究基金资助项目, No. NJ10183; 包头市社会发展科技支撑基金资助项目, No. 2008R2001-1.
作者贡献分布: 此课题由武金宝、张宏权、宋于刚及党彤设计; 研究过程由武金宝、党彤、陈学清、张振书、张宏权及宋于刚操作完成; 研究所用试剂及分析工具由党彤与宋于刚提供; 数据分析由武金宝与张宏权完成; 本论文写作由武金宝、张宏权及宋于刚完成.
通讯作者: 宋于刚, 医学博士, 教授, 主任医师, 510515, 广东省广州市, 南方医科大学南方医院消化科. songyg@fimmu.com
电话: 020-6164381
收稿日期: 2011-04-27
修回日期: 2011-06-21
接受日期: 2011-06-28
在线出版日期: 2011-09-18
Abstract

目的: 构建重组p21-activated kinase-1(PAK1)基因绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1/PAK1, 并转染入结直肠癌细胞SW480中表达.

方法: 在南方医科大学附属南方医院消化研究所实验室, 从人类结直肠癌细胞株SW620细胞提取总RNA, 经逆转录聚合酶链式反应获得人PAK1 cDNA片段, 经过限制性内切酶进行酶切, T4连接酶进行连接, 将目的基因克隆至真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1上, 然后转染结直肠癌细胞株SW480, 观察其在细胞中表达.

结果: 重组载体经限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列分析验证, 显示插入载体的序列与目的基因一致, 而且该重组载体能够在SW480细胞中表达.

结论: 成功构建了真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1/PAK1, 为研究PAK1在结直肠癌中的生物学功能奠定了基础.

Keywords: p21-activated kinase-1; 结直肠癌; 真核表达; 绿色荧光蛋白; 基因克隆