基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-09-08; 19(25): 2623-2628
Published online 2011-09-08. doi: 10.11569/wcjd.v19.i25.2623
RNAi特异性抑制FoxO3a对软脂酸诱导HepG2.2.15细胞凋亡的影响
熊清芳, 谢玉桃
熊清芳, 谢玉桃, 中南大学湘雅医院传染科 湖南省长沙市 410008
熊清芳, 博士, 副主任医师, 现在在南京市第二医院肝病科工作, 主要从事肝病研究.
基金项目: 湖南省自然科学基金资助项目, No. 09JJ5031.
作者贡献分布: 此课题由熊清芳与谢玉桃设计; 研究过程由熊清芳操作完成; 研究所用试剂及分析工具由谢玉桃提供; 数据分析由熊清芳完成; 本论文写作由熊清芳与谢玉桃完成.
通讯作者: 谢玉桃, 教授, 主任医师, 410008, 湖南省长沙市开福区88号, 中南大学湘雅医院传染科. drxieyutao@tom.com
电话: 0731-82346411
收稿日期: 2011-05-22
修回日期: 2011-08-25
接受日期: 2011-09-01
在线出版日期: 2011-09-08
Abstract

目的: 观察FoxO3a基因干扰对软脂酸诱导HepG2.2.15细胞凋亡的影响.

方法: HepG2.2.15细胞分五组: mock组(加脂质体)、FoxO3a siRNA组、FoxO3a siRNA+软脂酸组、阴性siRNA对照组、阴性siRNA+软脂酸组; Western blot法检测细胞的FoxO3a蛋白表达水平. MTT法检测细胞存活率; Annexin FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率; 检测细胞的caspase-3活性; RT-PCR检测细胞Bim、p27kip mRNA表达水平; 荧光显微镜观察荧光蛋白所在位置.

结果: FoxO3a siRNA+软脂酸组和FoxO3a siRNA组FoxO3 a总蛋白明显减少(P<0.05), 而其他各组基本相同. 与阴性siRNA+软脂酸组相比, FoxO3a siRNA+软脂酸组的存活率增加, 凋亡率、Caspase3活性下降, Bim mRNA、p27kip mRNA表达减少(P<0.05); 与FoxO3a siRNA 组相比, FoxO3a siRNA+软脂酸组的存活率减少, 凋亡率、caspase-3活性、Bim mRNA、p27kip mRNA增加(P<0.05); 阴性siRNA对照组、FoxO3a siRNA组、mock组的存活率、凋亡率、caspase-3活性、Bim mRNA、p27kip mRNA差异无统计学学意义(P>0.05); FoxO3a siRNA组细胞质的绿色荧光比细胞核多; 而FoxO3a siRNA+软脂酸正相反.

结论: FoxO3a-siRNA单独不能诱导HepG 2.2.15细胞凋亡, 但抑制FoxO3a的表达后能通过降低caspase-3活性、抑制Bim、p27Kip的表达, 从而减少软脂酸诱导的细胞凋亡. 并且FoxO3a是通过去磷酸化(失活)即核移位调控这一过程.

Keywords: 小干扰RNA; FoxO3a; 软脂酸; 凋亡; Bim; p27Kip; caspase-3